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上海达为科生物科技有限公司
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elisa检测实验技术服务
elisa检测实验技术服务质量:达为科生物提供的检测用所有试剂,适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本,灵敏度极高。
注意事项:在收集标本前都有一个完整的计划,清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测,对收集后当天就进行检测的标本,及时储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,请造模取材后,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在温差,蛋白极易降解,直接影响实验质量,所以避免反复冻融。
液体类标本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
血清:室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
尿液:用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
组织标本:切割标本后,称取重量。加入量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
elisa检测实验技术服务步骤:
1.包被抗原:稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液,多肽浓度2ug/ml,0.1ml/孔,4ºC过夜,洗净。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭,0.1ml/孔,37ºC1h,洗净。
3.稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔,37ºC 30分钟,洗净。
4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔,37ºC 40分钟,洗净。
5.显色:TMB显色
A液:四甲基联ben胺10mg 溶于DMF1ml中,再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.
B液:5ul双yang水加蒸馏水12.5ml 。终止液:2N硫酸
A液、B液各一滴,比光显色10分钟,终止液一滴。
6.450nm 波长测OD值
目前,上海达为科生物科技有限公司,主营实验技术服务、动物模型构建服务等,欢迎广大科研爱好者前来咨询选购!
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文献和实验运用Cell Based Elisa检测信号通路蛋白和磷酸化蛋白
研究信号通路时,特别是对于高通量样本检测,通过传统的WB方法来检测蛋白是一项非常费时费力的工作。为了解决这个问题,科学家开始尝试一种新的方法,希望更加高效,简单,没有任何辐射的来检测这些蛋白,尤其是信号传导研究中的磷酸化蛋白。Cell Based Elisa 提供了这样一种理想的,高效的,直接的检测大量样本的细胞信号通路蛋白的方法。我们通过了解Cell Based Elisa 的实验步骤来解析怎样检测高通量的样本中的蛋白,尤其是信号通路相关的蛋白。原理图1.在Cell Based Elisa中
对照孔)。 3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。 4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。 5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O・D值:在ELISA检测仪上,于450
【求助】ELISA检测中的问题参与者:zhou3303请教各位大虾,小弟用LPS刺激中性粒细胞(2.5×106/ml)表达细胞因子IL-1,TNF-a,IL-6的实验中,ELISA检测上清后,空白孔(只有培养液和细胞)的值也较高,有50pg/ml,甚至有的有300pg/ml,而LPS刺激组的值也只有空白组的2倍多,不知是什么原因,望不佞赐教。参与者:用心聆听我在做跟你类似的实验,我测的是TNF-a,IL-6,IL-8,我查过相关文献,排除操作误差问题的话,要看你的作用时间是多久,因为细胞在不受











