染料法支原体污染实时定量PCR试剂盒

染料法支原体污染实时定量PCR试剂盒

Dye-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma contamination

 

货号：Myco-qs-20，包装：20个反应

货号：Myco-qs-50，包装：50个反应

货号：Myco-qs-100，包装：100个反应

 

储存：-20度，避光保存，保质期一年。避免反复冻融。

 

试剂盒特点：

1，         对柔膜菌纲（包括支原体、螺原体和无胆甾原体）有极强的特异性，与柔膜菌纲以外的其他基因组无交叉反应。

2，         灵敏度高，最低可检出反应液中2-4个基因组。

3，         使用热启动的Taq酶，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

4，         带有阳性对照样品，可用于检验试剂盒有效性，也可用于验证待测样品中是否含有PCR抑制剂。

5，         带有ROX参比染料，帮助校正加样误差和管间差异。

 

支原体（Mycoplasma）是一类缺乏细胞壁的最小原核生物，是细胞培养中最常见的污染源之一。支原体体积微小（直径约0.2-0.8 μm），可通过0.22 μm滤膜，难以通过普通离心或过滤去除，在培养基中增殖周期较长（1-3天），在污染初期不易察觉，往往形成长期潜伏，严重影响细胞实验的可靠性和可重复性。支原体没有细胞壁，对β-内酰胺类抗生素天然耐药，因此青霉素对其无效。

支原体污染有多种检测方法：⑴PCR检测​法的原理是通过聚合酶链式反应扩增支原体基因，特异性好，灵敏度高，检测快速，但无法区分死活菌；⑵​荧光染色（Hoechst 33258/DAPI）法是用荧光染料结合DNA，在荧光显微镜下观察胞外斑点，直观，但灵敏度较低，易产生误判；⑶体外​培养法是采用支原体专用培养基进行体外培养，​是金标准方法，缺点是耗时，不同的支原体需2天-4周不等的时间，还有一些种类的支原体难以培养；⑷​ELISA/酶学检测，检测支原体特异性酶（如腺苷磷酸化酶），但可能有假阳性；⑸​qPCR/数字PCR​    定量检测支原体DNA ​高灵敏度、可定量，但成本较高

本试剂盒采用染料法实时定量PCR技术，专为快速、灵敏地检测细胞培养物、疫苗或其他生物制品中的支原体污染而设计，包含经过优化的预混反应体系，能够特异性扩增支原体16S rRNA基因保守区域，实验时只需加入样本DNA即可进行反应，大幅简化了操作流程。试剂盒内提供的阳性对照品含有特定支原体DNA片段，可用于验证实验有效性；阴性对照则用于确认体系无污染。

实验操作过程采用两步法PCR扩增程序。首先在50℃进行2分钟的UNG酶活化，随后在95℃进行预变性，接着进行40个循环的变性-退火/延伸步骤。反应过程中，荧光信号随着扩增产物的积累而增强，仪器可实时监测该信号变化。实验结果的判读建议以Ct值≤35为阳性判定标准，同时建议设置适当的扩增曲线阈值。对于临界值样本，建议重复检测以确认结果。试剂盒在使用前需完全融化并充分混匀，避免剧烈震荡产生气泡影响检测精度。

本试剂盒能够识别包括M.orale、M.arginini、M.hyorhinis等常见支原体物种在内的超过150种支原体，以及部分螺原体和无胆甾原体，同时，与亲缘关系较近的革兰氏阳性菌，如链球菌、梭菌、乳杆菌等，没有交叉反应，在检测范围和特异性方面达到欧洲药典的要求，欧洲药典提及的所有支原体均在本试剂盒的检测范围内；在灵敏度方面，最低检测值可以达到每个反应2-4个基因组，达到欧洲药典要求的10 CFU/mL的最低检测值。

本试剂盒可作为支原体通用检测试剂盒使用，适用于科研和工业领域，但不可用于临床诊断。实验操作应在符合分子生物学实验要求的洁净环境中进行，建议在样本处理区、试剂配制区和扩增区等独立区域完成不同步骤，以最大限度降低污染风险。本试剂盒不适用于嗜血支原体的检测。

 

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