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鹿森生物
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大量
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文献和实验、无 DNA 酶、无热原和 ATP 污染。 通常客户习惯自己去高温高压灭菌,但是高温高压灭菌过的吸头是不能完全保证去除生物污染。我们以「热原」举例,热原的耐热性能良好,180℃ 3~4 小时、200℃ 60 分钟或 250℃ 30~40 分钟方可使热原彻底破坏,而常规高温湿热灭菌 121℃ 30 分钟无法破坏热原活性。而且热原在日常环境中,甚至空气中随处存在,极易污染。 因此,要确保生物洁净需要在吸头生产过程中严格控制生物污染。具体可以从下面三方面考虑: 1、吸头原材料纯净无添加;
water:无Rnase的水。方法是:将DEPC按0.01%(V/V)加在dH2O中500 ml(50 ul),在37 ℃过夜,并高压灭菌即得(150 ℃ 3小时) 5. 一次性塑料手套 6. 注意:DEPC有致癌之嫌 7. 抽提出的细胞总RNA干燥后加水50 ul,取10 ul加无Rnase水990 ul,稀释100倍成1 ml。于0.5 cm厚的石英比色杯中,以无Rnase水为对照,在721型紫外分光光度计下检测,结果应为:A260/280 ratio 8. 分离组织10 mg
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过程 1. RNA提取和反转录 在抽提RNA过程中任一环节的不正确操作都可能导致RNA酶的污染。由于RNA酶的活性很难完全抑制,预防其污染是十分必要的。在实际的操作中应遵循下面一些原则: (1)全程佩戴一次性手套。皮肤经常带有细菌和霉菌,可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。 (2)使用灭菌的,一次性的塑料器皿和自动吸管抽提RNA,避免使用公共仪器所导致的RNA酶交叉污染。例如,使用RNA探针的实验室可能用RNA酶A或T1来降低滤纸
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