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Bio-Rad 的硝酸纤维膜能产生极好的结果,处理和保存更为简单。它不含纤维和树脂载体,是纯净的致密硝酸 纤维― 一种已经验证可应用于Western、Northern 和Southern 印迹杂交的介质。这类硝酸纤维膜没有普通硝酸 纤维常见的脆性。
孔径为0.45µm 的硝酸纤维膜推荐用于大多数分析型转印,包括蛋白、ssDNA、和RNA 转移。0.2 µm 的硝酸 纤维膜可用于转移小分子量蛋白(<15 kD) 或核酸,能避免由于膜转移而导致的样品损失。
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文献和实验4. 滤纸、胶和膜的问题 X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龙膜怎样鉴别? 解答:尼龙膜是较理想的核酸固相支持物,有多种类型;硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物,价格最便宜;PVDF膜介于二者之间。 就结合能力而言:尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm2,可结合短至10bp的核酸片段;硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80-100μg/cm2,对于200bp的核酸片段结合能力不强;PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125-300
0.2μm的膜了,如果用 0.45μm的膜就会发生“Blowthrough”的现象。从膜的质地上来看,最重要的指标就是单位面积上能够结合的蛋白的量。硝酸纤维素膜(NC膜)的结合能力主要与膜的硝酸纤维素的纯度有关,市场上有些硝酸纤维素膜(NC膜)通常会还有大量的醋酸纤维素,因而降低了蛋白的结合量。如果采用的是100%纯度的硝酸纤维素, 保证了最大的蛋白结合量,可达80-150μg/cm2。由于100%的纯度,因而也大大减少了非特异性的结合,降低杂交背景,无 需高严谨度的洗脱步骤。其次,膜的强度和韧性
Western blot中硝酸纤维膜和PVDF膜的选择及其特点
480-600μg/cm2,可结合短至10bp的核酸片段;硝酸纤维素膜(NC膜)结合DNA和RNA能力可达80-100μg/cm2,对于200bp的核酸片段结合能力不强;PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125-300μg/cm2。 就温度适应性而言:尼龙膜经烘烤或紫外线照射后,核酸中的部分嘧啶碱基可与膜上的正电荷结合;硝酸纤维素膜(NC膜)依靠疏水性相互作用结合DNA,结合不牢固;PVDF膜结合牢固,耐高温,特别适合于蛋白印迹 。 就韧性而言:尼龙膜较强;硝酸纤维素膜
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