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文献和实验我做大鼠心肌的醛固酮合酶RT-PCR,都2个月了,一点结果都没有,偶尔出一条带还不是我所需要的条带,最近有人看了我的基因序列发现局部GC 含量高,建议用la Taq,就又花了300多元反复作了多次还是没有结果,用脑及肾上腺的cDNA作阳性对照也同样,而用同样的cDNA能扩出其他4对目的基因。真郁闷啊,快过年了,老板说节前做不出来节后先上班,业余时间作试验,一定要做出来。看来春节过不好了!那位高手能指点迷津,在下多谢了。 我的条件是94度2min预变性,94度30se,58-68度30-40
. No. C110A 9362612) 10 mM dNTP 混合物 RNase-free DNase I (TaKaRa Code No. 2215 CA) 5U/μl Ex Taq polymerase 和10 × buffer (TaKaRa Code No. RR001D CA) 10μM specific Primer F and R Sterile ddH2O
序列如下: 引物 1:5’-CGGAATTCATGGACGGTCAGA-3’ 引物 2:5’-GCGTCGACTCATTCAGATTTGCG-3’ 6. Taq DNA 聚合酶(TaKaRa) 7. 琼指糖 8. 溴化乙锭(1%EB,终浓度0.5μg/mL) 9. DNA marker 2000(TaKaRa)
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