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上海玉博生物科技有限公司
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文献和实验一、实验试剂 1. 使用前,将RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。 2. 按下表用无水乙醇稀释DNA Wash Buffer,并于室温保存。 D6948-00B: 加入8 ml无水乙醇。 D6948-01B: 加入80 ml无水乙醇。 D6848-02B: 加入80 ml无水乙醇。 二、实验步骤 1. 取1.5-5 ml 菌液10 000 x g室温离心1min收集菌体沉淀; 2. 小心去除上清液,加250 ul
DNA提取试剂盒; EcoRI酶,MseI酶,T4连接酶试剂盒; Taq酶,dNTP, PCR reaction buffer; AFLP引物; 琼脂糖电泳试剂:琼脂糖,无毒GeneFinder核酸染料替代传统EB染料; 超纯水(18.2MΩ·cm) 2.其他实验需要物品 微量移液枪(一套)及相应尺寸Tip头,PCR管,冰浴等。 四
1. 琼脂糖凝胶电泳检测质粒为何有三条条带 通常完整的质粒电泳会看到多个电泳条带,这与质粒的多种形态有关。质粒可以有超螺旋,线性,开环等多种不同的形态,所以在电泳时常看到三条不同大小的条带,而最下面最亮的条带一般为超螺旋条带。 左图为电镜下的质粒形态,可以看到质粒有不同程度的超螺旋形态;右图为质粒电泳图 2. 质粒纯度不好 质粒中常见的污染杂质有蛋白质、基因组 DNA、RNA、乙醇等。这些杂质有可能是质粒提取过程中操作不当有关,比如: ①在加入裂解缓冲液后,剧烈震荡导致大肠杆菌基因组
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