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- 2025年07月14日
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文献和实验一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用
【资源】一种被广泛用于实时定量 PCR 的绿色荧光 DNA 染料
hotstart DNA 聚合酶。因此，与其他商业化的master mix 产品相比，Fast-Plus EvaGreen® qPCR Master Mix 可以为客户带来更为精确的实验结果。? EvaGreen®Dye:EvaGreen®是Biotium公司的DNA结合染料，它是一种同时适用于实时 PCR 和 高分辨率熔解曲线（HRM）分析的新一代染料。这种染料通过一种被称为“按要求释放”的全新机制，选择性的结合双链DNA。这一机制保证了较低的 PCR 抑制作用，同时也允许在染料饱和浓度以下进行高分辨率熔解
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用
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