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上海玉博生物科技有限公司
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文献和实验2)。 图2 使用BLOCK-iT™ Complete Dicer RNAi Kit得到>80%的靶定基因阻断 经Dicer酶切的,来源于β-半乳糖苷酶或者荧光素酶的dsRNA产生siRNA(d-siRNA)库,用来确定d-siRNA特异阻断基因活性的效果。GripTite™ 293 MSR 细胞共转染pcDNA™1.2/V5-GW/lacZ阳性对照质粒和pcDNA™5/FRT/luc,分别独自表达β-gal或者荧光素酶报告子,或者50ng luc 或者lacZ d-siRNA。对于每一种报告子
with the better the chances of a successful pulldown. A total of 4.0×106 293 HEK cells (~70% confluent) are plated and 24 hours later transfected with 15µg of a RNA Polymerase II expressing flag-tagged construct plasmid. We generally use Lipofectamine 2000™
Transfecting Suspension Cells(悬浮细胞转染)
in 28 ml of FreeStyle™ 293 Expression Medium. Expand cells accordingly, taking into account the cell doubling time. For FreeStyle™ 293-F cells, this equates to passing cells at ~6–7 × 10 5 cells/ml. 2.On the day of transfection
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