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文献和实验in the past - Sigma #N-4388; so we now use powdered media from Gibco #21700-075 or liquid media from Gibco #11765-054. Neither of these have Hepes buffering) 1) Start by rinsing a graduated cylinder three times ddH2 O. 2) Then fill the cylinder to 600-ml
胶质细胞层的上面然后运用旋转摇床以260rpm 18小时摇荡分离,通过30μm的尼龙网过滤,然后细胞悬液接种到含无血清培养基的培养皿中。培养基成分:DMEM-Ham‘s F-12混合物(1:1),10mM HEPES,0.1%牛血清蛋白,25μg/mL 人铁转蛋白,30nM三碘甲状腺氨酸,20nM氢化可的松,20nM黄体酮,10nM 维生素H,5μg /mL胰岛素,16μg/mL腐胺,30nM硒,50U/mL 青霉素和50μg/mL 链霉素,还含有2.5ng/mL 血小板源性生长因子AA和2.5ng/mL
基加入适量的BrdU以抑制其生长,纯化心肌细胞。(2)FBS的作用不仅仅是拿来中和胰酶,只是FBS中的一些蛋白质如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用。(3)元代心肌细胞培养的FBS使用,有讲究:刚开始使用20%左右的高浓度的FBS,后逐渐递减为无血清的DMEM/F-12培养基培养。2、问:我胰酶的用量是0.08% ,并混和了0.08%的胶原酶。FBS要高浓度递减是否是说的在细胞培养中啊,难道在消化时终止也需要如此高的浓度吗,还有,我的BRDU只用到48小时就不用了,因为担心其损伤太大,可以持续用多久呢?答:我用10
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