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文献和实验台盼蓝(trypan blue)排斥实验一、目的学习台盼蓝排斥实验的原理和方法二、概述台盼蓝又称锥蓝,是一种阴离子型染料,这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色,但死亡细胞的细胞膜通透性增加,可使染料通过细胞膜进入细胞内,使死细胞着色呈蓝色。是最常用的检测细胞活率的方法。细胞活力常用百分比表示,活力的大小对试验结果有很大影响。细胞活力的测定有许多方法,最简便常用的方法是台盼蓝(trypan blue)染色法。三
材料: 1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管; 2. 试剂:0.4%台盼蓝染液; 3. 台盼蓝(Trypan blue):0.4g; 4. 生理盐水:100ml; 操作步骤: 1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液; 2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁
问: 现在刚刚开始做干细胞,想自己计数白细胞,用的是Sigma的0.4%台盼蓝,1:1混合,从2分钟开始细胞死亡越来越多,例如2分时有10%死亡,到5分钟就死一半了,到底是几分钟计数最准确呢?& 还有一个问题,看到有1:1使用,也有1:9的,用哪种浓度最好呢? 答1 :0.4%应该是1:1混合的,1:9的是4%浓度的,这个染色的时间不应该太长的,因为对于胎盘蓝这种大分子,不能渗透就如细胞膜,但是如果染色
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