Immunolab GmbH 代理商|MIL-E01 过敏原

【资源】Western Blot 简略而细致

6C5）能够与鱼、蛙、鸡、兔、小鼠、大鼠及人组织来源的GAPDH反应，但不能与酵母GAPDH反应。一般我们选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上。 图示: A-G分别表示不同实验小鼠心脏蛋白（上样量50ug），兔抗小鼠Akt抗体（康成生物Cat＃KC-5A01）检测心脏组织匀浆中Akt水平。加入兔二抗（康成生物Cat＃KC-RB-035，稀释比例为1：5，000）时同时加入HRP标记的抗GAPDH单抗（稀释比例为1：10，000，康成生物Cat＃KC-5G5）。采用化学发光试剂盒

【资源】个人整理 Western Blot（步骤简略，但注意事项、经验总结、基本原理很全面）

工作)。A. 将膜泡入甲醇中，约1-2分钟。再转入transfer buffer中。B. 将合适的靠胶滤纸和靠膜滤纸分别泡入transfer buffer 中。（2）转移A. 将膜铺在靠膜滤纸上，注意和滤纸间不要有气泡，再倒一些transfer buffer到膜上，保持膜的湿润。B. 将胶剥出，去掉stack gel，小心的移到膜上。C. 剪去膜的左上角，在膜上用铅笔标记出胶的位置。D. 将一张靠胶滤纸覆盖在胶上。 倒上些transfer buffer，再铺两张靠胶滤纸。E. 转移过程中要随时观察电压