小鼠类固醇5α还原酶2ELISA试剂盒

小鼠类固醇5α还原酶2ELISA检测试剂盒说明书实验原理:
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人1-磷酸鞘氨醇（S1P）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人1-磷酸鞘氨醇（S1P）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

Jarid2    组蛋白去甲基化酶JARID2抗体
JAKMIP2    JAK和微管相互作用蛋白2抗体
JunB    活化蛋白激酶B抗体
phospho-JAK2    磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗体
JMJD6    凋亡细胞清除受体抗体
phospho-c-Jun    磷酸化原癌基因c-Jun抗体
Jagged 2    Notch配体Jagged 2蛋白抗体
Jarid1C    组蛋白去甲基化Jarid1C抗体
JMJD1B    组蛋白去甲基转移酶JMJD1B抗体
Junctophilin-2    亲联蛋白2抗体
KIF13B    驱动蛋白家族蛋白13B抗体
KIF7    驱动蛋白家族蛋白7抗体
KAT3A    CREB结合蛋白抗体
KNDC1    脑蛋白9抗体
Kindlin 2    丝裂原诱导蛋白2抗体
KLF17    锌指蛋白393抗体
KDM1    组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1抗体
KIF11    驱动蛋白样蛋白1抗体
KMT3B    组蛋白甲基化KMT3B抗体
Kv4.3    离子通道蛋白Kv4.3抗体
KLLN     Killin-p53调节复制抑制蛋白抗体
Lysyl tRNA synthetase    赖氨酸tRNA的连接酶抗体
Kidins220    220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗体
phospho-Kidins220     磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗体
KRV-VP1 + KRV-VP2     基尔曼氏细小病毒VP1/VP2抗体C端
KCNQ1    钾离子通道蛋白家族KCNQ1抗体
KMT1A    组蛋白H3 K9甲基转移酶抗体
KAT13D    生物钟KAT13D蛋白抗体
KLHL36    Kelch样蛋白36抗体
KCC4    钾氯离子转运蛋白KCC4抗体
phospho-KCNA3    磷酸化离子通道蛋白Kv1.3抗体
KCNE4    钾离子通道蛋白家族成员4抗体
KCNF1    电压门控性钾通道蛋白亚基kv5.1抗体
KCNG1    电压门控性钾通道蛋白亚基kv6.1抗体
KCNG3    电压门控性钾通道蛋白亚基KV6.3抗体
phospho-KCNJ1    磷酸化细胞内流钾通道蛋白KCNJ1抗体
KCNT2    钙激活钾通道蛋白KCNT2抗体
KIR5.1    细胞内流钾通道蛋白Kir5.1抗体
小鼠类固醇5α还原酶2ELISA检测试剂盒说明书phospho-KIR5.1    磷酸化细胞内流钾通道蛋白Kir5.1抗体
phospho-Kir6.2    磷酸化ATP敏感性钾通道亚基kir6.2抗体
KCNA2B    电压门控钾通道蛋白KVβ.2抗体
Kv1.4    电压门控性钾通道蛋白Kv1.4抗体
Kv1.6    电压门控性钾通道Kv1.6抗体
phospho-Kv2.1    磷酸化钾通道蛋白DRK1抗体
Kv2.2    电压门控性钾通道Kv2.2抗体
KIF3A    驱动蛋白家族蛋白3抗体
KLC1    驱动蛋白2抗体
KIAA1522    KIAA1522蛋白抗体
KCTD5    钾离子通道四聚体结构域蛋白5抗体
KLMW Kininogen    高分子量激肽原重链抗体

样本处理及要求:
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 需要而未提供的试剂和器材: 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 4.蒸馏水或去离子水

注意事项:
1.严格按照规定的时间和被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：
①标本因素；
②试剂因素；
③操作因素。

特点:
1、适用于血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
2、可检测动物类型丰富：人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、鸡、虾、鱼等。
3、可检测指标齐全：白介素，干扰素，肺炎衣原体，血管紧张素，炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等指标。
自备材料:
1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。
安全性:
1）避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。 2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品。
10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。