重组牛肠激酶

重组牛肠激酶 重组牛肠激酶 名称：重组牛肠激酶 重组牛肠激酶 货号：YT0920 英文名称：Enterokinasefrombovineintestine重组牛肠激酶 品牌：伊塔生物 CAS:13321 规格：100u，

英文名称	Enterokinase from bovine intestine
CAS	9014-74-8
分子量	25850Da
储存条件	-20℃
规格	100U
外观（性状）	液体
酶活/效价	10U/ul
单位	瓶
有效期	1年

重组肠激酶产品说明书

货号：YT0920

规格：100U

保存：-20℃保存。可在常温下运输，25℃可稳定保存一周。

产品简介：

本公司肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶。该酶经HPLC纯化，纯度高，特异性高，并且不含其他蛋白酶。肠激酶（EC3.4.21.9）是一个特定的蛋白酶，它可以切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸。肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。

来源：重组大肠杆菌

理论MW：25,850Da

活性：1U定义为在25℃，12h~16h之内，将0.5mg融合蛋白在25mM Tris-HCl pH8.0缓冲液中的切割95%所需的酶量。

高特异性

1）特定的蛋白酶，切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸(DDDDK)。

2）不含其他蛋白酶,无非特异性切割。

图一：SDS-PAGE检测结果，纯化的肠激酶一个单一的主带。

图二：0.1U的EK作用于50μg底物0min,10min,20min,30min,40min,50min,60min后的SDS-PAGE分析。

酶切条件：

按照酶活性定义，重组EK酶切条件举例：25mM Tris-HCl pH8.0体系中：

融合蛋白浓度 0.1-1mg/ml（蛋白总量0.5-1.0mg）

重组EK用量 1-2U

温度 25℃

过夜酶切，或完全酶切需12h-16h。

常见影响肠激酶活性的因素:

在＞200mM咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切：

1）为获得理想酶切结果，请将样品透析到25mM Tris-HCl pH8.0缓冲液中，再进行酶切。

2）若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在100mM以下，NaCl浓度在50mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即1U酶切0.5mg蛋白）。

3）如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。