霍乱弧菌型LAMP试剂盒

霍乱弧菌型LAMP试剂盒储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法 1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

1/FITC  荧光素标记MD-2蛋白抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-Lysozyme/FITC  荧光素标记溶菌酶抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-Phospho-Lyn (Tyr507) /FITC  荧光素标记膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-Phospho-Lyn (Tyr396) /FITC  荧光素标记磷酸化膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-Phospho-Lyn (Tyr497) /FITC  荧光素标记磷酸化膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-LYVE-1/FITC  荧光素标记淋巴管内皮透明质酸受体抗体        
Multi-class antibodies    Anti-M2-PK /FITC  荧光素标记酸激酶-M2抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-M2-PK /FITC  荧光素标记酸激酶-M2（小鼠来源抗体）IgG        
Multi-class antibodies    Anti-Phospho-PKM2 (Tyr105) /FITC  荧光素标记磷酸化酸激酶M2抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-Mad1/FITC  荧光素标记Mad1抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MAdCAM-1/FITC  荧光素标记粘膜血管定居因子抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MAdCAM-1/Biotin  生物素标记粘膜血管定居因子抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-Mafa/FITC  荧光素标记v-maf 肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A抗体（禽流感）IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MAFbx/Fbx32/Atrogin-1/FITC  荧光素标记泛素蛋白连接酶抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MAG-a/L-MAG /FITC  荧光素标记髓鞘相关糖蛋白-a抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MAG-a/b /FITC  荧光素标记髓鞘相关糖蛋白a/b抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MAGE-1/HLA-A1 protein /FITC  荧光素标记黑素瘤抗原-1抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MAGE-A4/FITC  荧光素标记黑色素瘤相关抗原4抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MARCKS /FITC  荧光素标记丙氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MAP1A/Mtap1a /FITC  荧光素标记微管相关蛋白1A抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MAP1LC3A/FITC  荧光素标记自噬微管相关蛋白轻链3抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MAP-2/FITC  荧光素标记微管相关蛋白2抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-Phospho-MAP2 (Ser136) /FITC  荧光素标记磷酸化微管相关蛋白2抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-Phospho-MAP2 (Thr1620/1623) /FITC  荧光素标记磷酸化微管相关蛋白2抗体IgG        
霍乱弧菌型LAMP试剂盒Multi-class antibodies    Anti-ERK1/MAPK3/FITC  荧光素标记丝裂原活化蛋白激酶3抗体IgG        
Multi-class antibodies    Anti-MAPK4/FITC  荧光素标使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

具有如下优点：
　　(1)操作简单，LAMP核酸扩增是在等温条件下进行，对于中小医院只需要水浴锅即可，产物检测用肉眼观察或浊度仪检测沉淀浊度即可判断。对于RNA的扩增只需要在反应体系中加入逆转录酶可同步进行(RT．LAMP)，不需要特殊的试剂及仪器。
　　(2)快速高效，因为不需要预先的双链DNA热变性．避免了温度循环而造成的时间损失．核酸扩增在l h内均可完成，添加环状引物后时间可以节省1／2，多数情况在20。30 rain均可检测到扩增产物。且产物可以扩增至109倍，达0.5 mg／mL．应用专门的浊度仪可以达到实时定量检测。
　　(3)高特异性，由于是针对靶序列6个区域设计的4种特异性引物。6个区域中任何区域与引物不匹配均不能进行核酸扩增。故其特异性极高。
　　(4)高灵敏度，对于病毒扩增模板可达几个拷贝，比PCR高出数量级的差异。
缺点：由于LAMP扩增是链置换合成，靶序列长度在300 bp以内 gt;500 bp则较难扩增。故不能进行长链DNA的扩增。由于灵敏度高。极易受到污染而产生假阳性结果。故要特别注意严谨操作，以及在产物的回收鉴定、克隆、单链分离方面均逊色于传统的PCR方法。
　　二、LAMP（20μL 体系）
　　3. 反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则设置 N+4 个 LAMP 扩增，增加 LAMP 阴性对照和阴性对照各 1 个。在 N+4 个 PCR 管中加入下列成分：
　　4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。
　　5. 置于 25℃5min（让 UNG 灭活可能的 LAMP 的污染），然后放 61℃扩增60min。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加 50μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。
　　6. 80℃10min 灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。 　　7. 将反应管放置在白色背景前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。
　　8. 实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）：如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL LAMP 扩增产物直接进行 2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 loading buffer），使用 100 bpDNA Marker。如果样品为阳性，将会得到梯形扩增产物。典型的电泳结果见下图（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的 9 号和 10 号跟上步照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）。