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低温冷藏
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详见说明书
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100
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上海莼试
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50T
典型的PCR由
(1)高温变性模板;
(2)引物与模板退火;
(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。
其主要步骤是:
将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;
耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。
phospho-PKA beta 磷酸化蛋白激酶Aβ抗体
PKA R2 蛋白激酶A受体2α亚基抗体
phospho-PKA R2 磷酸化蛋白激酶A受体2α亚基抗体
PKA gamma 蛋白激酶Aγ抗体
PKA regulatory subunit I beta 蛋白激酶受体相关1β抗体
PRDM1 B淋巴细胞诱导成熟蛋白1抗体
phospho-PTPRA 磷酸化酪氨酸磷酸酶α抗体
PRKAR1 蛋白激酶A调节亚基a1抗体
phospho-PTPRA 磷酸化酪氨酸磷酸酶α抗体
PDZD5A PDZ结构域PDZK5A蛋白抗体
PPAP2A 磷酸脂磷酸水解酶1抗体
P14ARF 抑癌基因p16/p14/P19抗体
PTPH1 蛋白酪氨酸磷酸酶H1抗体
phospho-PI 3 Kinase p110 delta 磷酸化磷脂酰肌醇激酶催化亚单位D抗体
phospho-RAD9 磷酸化细胞周期检查控制蛋白质抗体
Perforin 穿孔素抗体
PALM3 PALM3抗体
PON1 芳香酯酶1抗体
PNPO 磷酸吡哆醇氧化酶抗体
phospho-PRKCB 磷酸化蛋白激酶C抗体
phospho-PRKCB 磷酸化蛋白激酶C抗体
Phospho-PTEN 磷酸化肿瘤抑制基因PTEN抗体
phospho-PI3KCA 磷酸化磷脂酰肌醇激酶催化亚单位A抗体
phospho-PIK3R1 磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗体
phospho-PIK3R1 磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗体
phospho-PRKCA 磷酸化蛋白激酶C抗体
phospho-PRKCA 磷酸化蛋白激酶C抗体
phospho-AMPK alpha 2 磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体
SHP1 蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗体
phospho-PTPN6 磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗体
转基因品系大豆A2704-12 LAMP试剂盒phospho-PTPN6 磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗体
PI 3 Kinase Class 3 磷脂酰肌醇激酶3催化亚单位3抗体
phospho-PIK3C3 磷酸化磷脂酰肌醇激酶3催化亚单位3抗体
phospho-PIK3C3 磷酸化磷脂酰肌醇激酶3催化亚单位3抗体
phospho-PRKCQ 磷酸化蛋白激酶C theta抗体
PI 3 Kinase p85 beta 磷脂酰肌醇激酶p85β抗体
phospho-PIK3R2 磷酸化磷脂酰肌醇激酶p85β抗体
phospho-PPM1A 磷酸化蛋白磷酸酶2C亚型α抗体
P2X2 三磷酸腺苷受体受体P2X2抗体
Phospho-Paxillin 磷酸化桩蛋白Paxillin抗体
PLAG1 多型性腺瘤基因1蛋白抗体
Pokemon/ZBTB7 扑克蒙蛋白抗体
Protein CASP CASP抗体
PIM1+PIM3 丝氨酸/苏氨酸激酶蛋白PIM1+PIM3抗体
PACSIN3 胞浆蛋白PACSIN3抗体
PAG1 跨膜接头蛋白PAG抗体
PARD6G PARD6G蛋白抗体
PL6 胎盘蛋白6抗体
PIK3AP1 磷酸肌醇3激酶接头蛋白1抗体
PRAM1 PRAM1蛋白抗体
Pan Cytokeratin/p-CK 广谱细胞角蛋白PCK抗体
PDZ RHOGEF/GTRAP48 Rho鸟甘酸转运蛋白抗体
phospho-PIK3R1 磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗体
phospho-PARK2 磷酸化帕金蛋白抗体
phospho-PARK2 磷酸化帕金蛋白抗体
Phospho-PDGF Receptor beta 磷酸化血小板源性生长因子受体B抗体
Phospho-PDGF Receptor beta 磷酸化血小板源性生长因子受体B抗体
PAK6 P21蛋白激活的蛋白激酶6抗体
phospho-PAK6 磷酸化P21蛋白激活的蛋白激酶6
PTPRA 酪氨酸磷酸酶α抗体
PTPN7 非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶7抗体
phospho-PTPN7 磷酸化非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶7抗体
phospho-PTPN7 磷酸化非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶7抗体
phospho-PKC delta 磷酸化蛋白激酶C亚性D型抗体
PKC mu 蛋白激酶C mu型抗体
操作步骤 :
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
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文献和实验LAMP引物设计的在线网站(http://primerexplorer.jp/e/),只要导入靶基因就能自动生成成组引物。 以某一微生物的鞭毛基因为例讲解一下LAMP相物设计的过程: 首先单击浏览钮择靶基因序列文件,靶序列默认的是小于2 2 kbp。支持三个类型的文件,普通文本格式(仅含序列), FASTA格式和GenBank 格式文件。 第二,从下面个项中择定参数设定(引物设计条件条件。基于GC含量的自动判断, 起始的参数是特定的:如果GC含量小于或等于45%.,则选取AT丰度高的区
1.LAMP引物的设计LAMP引物的设计主要是针对靶基因的六个不同的区域,基于靶基因3' 端的F3c、F2c和Flc区以及5' 端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种引物。FIP(Forward Inner Primer):上游内部引物,由F2区和F1C区域组成,F2区与靶基因3’端的F2c区域互补,F1C区与靶基因5' 端的Flc区域序列相同。F3引物:上游外部引物(Forward Outer Primer),由F3区组成,并与靶基因的F3c区域互补。BIP引物:下游内部引物
组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注,短短几年,该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中,在这次甲型H1N1流感事件中,日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。通过荣研公司近十年的推广,LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中,并得到了欧美国家的认同。LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外,操作十分简单,对仪器设备要求低,一台水浴锅或恒温箱就能实现反应,结果的检测也很简单,不需要像PCR
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