- ￥8000
- 多抗一般制备流程:完全抗原的准备- +兔子的免疫-→ 效价检测和终放- +抗体亲和纯化- +抗体的浓缩和保存。
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- 2026年04月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海研谨生物
- 服务名称：
多克隆抗体制备代做服务
提供商: 上海研谨生物
规格: 实验代做服务
价格：8000元
收费标准/服务周期/提供结果:
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多克隆抗体制备服务
多抗一般制备流程:完全抗原的准备- +兔子的免疫-→ 效价检测和终放- +抗体亲和纯化- +抗体的浓缩和保存。
具体实验步骤如下:
1.兔子的准备
挑选健康的6周大小的新西兰大白兔两只(约2Kg) ，使其适应新的生活环境，至少稳定几天再进行首次取血、预采血(作阴性参照用)
1.1将兔子小心的放入固定的架中，使兔子平静;
1.2小心剃去兔耳上的毛以使血管清晰可见(也可不剃);
1.3如果有必要，可用小棉球沾酒精涂抹血管部位使血管膨胀;
1.4用注射器从耳静脉抽取约10ml血液(约5ml血清);
1.5小心抽出针头，适当按压伤口以免流血，然后用酒精棉球消毒伤口;
1.6将收集的血液置于37 C灭活30min,最后置于4" C过夜使其凝结释放血清;
1.7将凝结好的血液在10000r / min离心10min; h.收集 上清，即为血清。
兔子的免疫
2.1注射两只兔子的抗原为1ml,抗原缓冲溶液必须不含对兔子有害的化学试剂每只兔子初次免疫400ug抗原比较适合，也可适当减少以获得更好的结果，后续免疫每次为100ug即可。
2.2将1m的佛氏完全佐剂与准备好的1m抗原充分混匀，呈乳白色; .
2.3小心从笼中取出兔子,织兔子免疫4个部位(背部和大腿根部均可)，每个部位250ul,针头呈45度角插入皮下1-2cm,注射完后停留数秒以防止抗原外流。
2.4兔疫周期为20天，免疫完后7-10天取血(包括中途测试取血和最终放血)，总共免疫4-5次。
3.效价检测
3.1 2个参照阴性参照为预取血血清，均以1抗起始浓度稀释(封闭稀释液);阳性参照为以前
阳性血清
3.2于96孔板中每孔滴加100ul, 1ug/m抗原，于49C过夜， 也可以37°C孵育2小时。
3.3倒掉抗原溶液，每孔加入200u的封闭液， 49C过夜或者379C孵育2小时。
3.4倒去封闭液，在吸水纸上拍打尽量吸干残留液体，用洗涤液洗板三次每次尽量拍干残留液体，若要放置一段时间, 37°C烘干并用封口袋封好于20°C存放。
3.5取包被好的96孔板，第---孔加入阴性 参照液100ul,第二孔加入阳性参照液100ul,第三孔加入1:500的待测抗血清，后续各孔在此基础上倍比稀释,于37°C孵育1 小时。
3.6倒掉液体，用洗涤液洗板三次,拍干。每孔加入100u的HRP标记的小鼠抗兔lgG (1: 2000稀释)，于37°C孵育45分钟。
3.7倒掉液体，用洗涤液洗板三次，拍干。每孔加入100u的TMB底物(Sigma 单组份TMB ) 37°C孵育5-20分 钟(根据颜色深浅来决定显色的时间)。
3.8每孔加入50u的终止液(2N H2SO4)， 在酶标仪上读取波长450nm处的吸光值。
抗体效价检测达到100万以上后可以对兔子进行终放血。
抗体的纯化
4.抗体的亲和--亲和柱的制备
4.1 称取1mg CNBr- Sepherose 4B的琼脂糖凝胶加入2mmol/ L的盐酸中，4" C过夜使其充分溶涨，可获得3m溶涨胶。
4.2将凝胶转移入纯化柱中，用约20ml 2mmol / L的盐酸洗介质3次。
4.3用偶联缓冲液洗介质- -次，因为活化基团在偶联缓冲液PH值下易水解，所以此步骤zui好在几分钟内完成。
4.4将溶解在5ml偶联缓冲液中的5-10mg的抗原加入凝胶中
4.5室温下轻轻混合摇动2-4小时，或4" C过夜,如需测定结合效率此步骤结束后取少量溶液待测。用20ml的偶联缓冲液洗介质一-次。
4.6加入15m1 1% BSA溶液室温下孵育2小时或4" C过夜。
4.7用磷酸盐缓冲液洗涤介质3次以上,每次15m以上h.
4.8抗原固相化完成，可用于纯化。
4.9若不立即使用或者使用后，用20%的乙醇封存。
5.抗血清的纯化和保存
5.1抗血清用PBS等体积稀释，5000-10000 / min离心15分钟，取上清.
5.2用10倍体积的PBS清洗抗原亲和柱以平衡柱子。
5.3将稀释好的抗血清10m加入平衡好的柱子中。
5.4室温下轻轻混合摇动2-4小时，或4" C过夜
5.5用10倍体积的PBS清洗抗原柱，以洗去结合在柱子上的杂蛋白
5.6用2倍体积的抗体洗脱液洗涤柱子，以得到特异性抗体
5.7用10倍体积PBS平衡柱子
5.8用20%的酒精封存柱子，4'C保存。
在得到洗脱的抗体后，经蔗糖或聚乙二醇浓缩后于PBS中透析除盐，使用紫外可见分光光度计在波长280nm处测定抗体OD值，所得OD值除以1.35即为所测抗体的浓度，添加40-50%甘油置于20^C可长期保存。
实验代做服务：
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文献和实验【实验 目的 】 ⒈ 加深对抗体基本知识的了解。 ⒉ 了解多克隆抗体的制备及纯化的基本方法。 ⒊ 了解免疫电泳的基本过程和实验依据。 一、多克隆抗体的制备 【实验 原理 】 当将抗原注射入实验动物体内时，一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合，受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体，这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体
制备多克隆抗体的佐剂 如用可溶性蛋白质抗原免疫家兔或山羊，在加用佐剂时一次注入量一般为0.5～1mg/kg。如不加佐剂，则抗原剂量应加大10～20倍。佐剂有福氏(Freund’s)佐剂、脂质体佐剂、氢氧化铝佐剂、明矾佐剂以及免疫刺激复合物(immune stimulating complex，ICOM)等。 其中最常用的是福氏佐剂，根据其组成分为完全福氏佐剂（CFA）和不完全福氏佐剂（IFA）两种。IFA通常由羊毛脂1份、石腊油5份组成，每毫升IFA中
一、器材 剪刀（剪兔毛用）一把、弯头眼科手术镊子（游离血管用）一把、直头眼科手术剪（剪血管用）一把，手术刀架，手术刀片，注射器（1ml、10ml，25ml）附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶（200ml）或平皿（直径18cm）、弯头止血钳四把，直头止血钳两把，手术缝合线，塑料放血管，纱布等。 二、试剂 生理盐水（或PBS） 弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant， FCA） Sigma F-5881 弗氏不完全佐剂（Freund’s incomplete
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