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普健生物(武汉)科技有限公司
- 服务名称:
TA克隆
- 规格:
TA克隆
TA克隆技术服务
TA克隆是利用Taq聚合酶具有末端转移酶活性,但是不具有3’~5’端外切酶活性,因此PCR产物的3’端加上了一个非模板依赖碱基“A”。T载体是一种高效PCR产物克隆载体,T载体的3’端带有一个突出“T”尾,能够与PCR产物的“A”尾相连接,提高了克隆效率。
普健生物TA克隆服务流程:
1.PCR。
2.TA连接。
3.转化筛选。
4.测序。
交付内容:
1.2ug质粒。2.甘油菌。
3.测序图谱。
4.TA克隆实验报告。
服务内容:
| 服务编号 | 服务内容 | 时间 | 价格(¥) |
ata-G003 |
片段长度小于1500bp | 5个工作日 | 询价 |
| 1500bp~3000bp | 5~10个工作日 | 询价 | |
| 大于3000bp | 5~10个工作日 | 询价 |
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文献和实验- Pyk2/MCU Pathway as a New Target for Reversing Atherosclerosis
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- Snow flea antifreeze peptide for cryopreservation of lactic acid bacteria
- Cancer cell-expressed BTNL2 facilitates tumour immune escape via engagement with IL-17A-producing γδ T cells
PCR产物的TA克隆 (DNA的胶回收和连接) 【实验目的】 1.掌握DNA回收和连接的基本原理。 2.学习和掌握PCR产物的T-vector克隆。 【实验
快速TA克隆的突破T载体是TA克隆载体的简称,就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。目前市场上常见的T载体,根据连接方法可以分成两种:方法1、以T4连接酶进行连接的方法,这种方法的载体有promega、takara;可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平,转化子比较多,阳性率也不错,唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高,要达到较好的连接效率,一般要过夜连接。国内很多公司模仿这种方法制作T载体,不仅连接时间也很长,而且做不到
现象可能原因解决方案 转化后无菌落生长 感受态细胞已经失效用pUC18质粒进行转化,确认细胞的感受态效率。1ng pUC18质粒至少应得到1000个以上的转化子。如有问题,重新制备感受态细胞。 平板所用抗性不对pBS-T载体为amp抗性,工作浓度 100 ug/ml 连接中使用了不恰当的vector:insert 比例估计PCR产物的量,将vector:insert比例限制在3:1到 1:5的范围内。对于极小的PCR产物进行克隆,很可能因为PCR产物严重过量,导致无菌落或菌落极少。 白色
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