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- 武汉
- 稳定细胞株已广泛应用于重组蛋白和抗体生产、检测分析、免疫治疗药物开发等研究领域，表达的蛋白/抗体稳定性更好、批次间差异小，是生物医药研发的基础。
- 2025年07月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
稳定细胞株构建
- 提供商：
普健生物
- 规格：
稳定细胞株构建
服务简介
细胞转染，是将外源分子(如 DNA,RNA 等)导入真核细胞中的一种技术;
转染分为：瞬时转染和稳定转染
瞬时转染：指外源 DNA 或 RNA 转入宿主细胞后不整合到宿主染色体中进行外源目的基因的表达
稳定转染：指外源 DNA 转入宿主细胞后将外源目的基因整合到宿主染色体中进行表达
稳定转染的特点：
1. 目的基因整合到染色体上，需要使用线性 DNA(线性 DNA 虽然比超螺旋状的 DNA 转入量低，但整合率高)
2. 外源 DNA 整合到宿主细胞染色体中大约为 1%，通常需要通过一些选择性标记反复筛选，才能得到稳定转染的同源细胞系
3. 随宿主细胞基因组复制、转录、翻译，并被稳定遗传
4. 用于获得稳定表达的外源基因的单细胞克隆：如大规模蛋白质的合成，长期的药理学研究遗传机制的研究等
稳定细胞株：一般是将外源 DNA 克隆到具有某种抗性或者选择基因的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到染色体中，用载体中所含的选择标志进行筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白的细胞株
服务流程：
服务优势
高质：外源基因严格鉴定，细胞来源清晰，无污染
高产：重组蛋白 / 抗体表达量可快速优化至 2g/L 以上稳定表达
稳定：独有的 GS 稳转系列载体配合 MSX 药物筛选，实现稳定传代 15 代以上
快速：筛选高产细胞株，周期短至 3 个月
灵活定制：可针对重组蛋白 / 抗体全长或片段进行个性化表达
经验丰富：专业的技术团队，已成功为国内外多家医药公司和研究单位构建交付稳定细胞株
多筛选系统：G418/ 潮霉素 / 嘌呤霉素筛选系统，GS/DHFR 双基因筛选系统等
服务内容
| 服务内容 | 客户提供 | 服务步骤 | 服务周期 | 交付内容 |
| 重组抗体，细胞因子等生物药的稳转细胞系前期筛选 | 基因序列 载体 细胞 |
重组表达质粒构建 | 1周 | 稳转细胞株 技术服务报告 |
| 药物本底浓度测定 | 1-2周 | |||
| 细胞转染 | 1天 | |||
| 多克隆稳定细胞株筛选及鉴定 | 2-3周 | |||
| 单克隆稳定细胞株筛选及鉴定 | 3-4周 | |||
| 稳转细胞株产量、活性检测及稳定性研究(根据客户需求) |
案例展示
构建生产重组抗体的CHO稳定细胞株
公司大楼坐落于东湖新技术开发区神墩四路, 这里绿叶繁茂，道路宽敞，周围有一众生物科技型高新企业。普健生物作为一员加入此处，为周遭增添了一抹亮丽的色彩。
公司立足于生命科学领域，自主建立三大完善的技术服务平台：生命科学研究平台、诊断原料开发平台、抗体药物研发平台。生命科学平台：拥有五大成熟高效的蛋白表达系统（枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞），鼠/兔单克隆抗体平台，可提供蛋白表达、分子构建-蛋白表达纯化-结构解析、抗体重组表达、鼠/兔单克隆抗体制备以及相关检测服务。诊断原料开发平台：拥有开放式化学发光自动平台，可缩短研发周期、降低开发成本与技术风险，为广大客户提供各种诊断核心原料开发。抗体药物发现平台以杂交瘤筛选与噬菌体展示技术为主，目前已完成构建并对外提供抗体筛选技术服务的文库有：新冠特异性抗体噬菌体文库、羊驼天然纳米抗体噬菌体文库、兔源天然抗体噬菌体文库、小鼠天然抗体噬菌体文库。同时也开发了大量的重组蛋白、抗体、工具酶、药物对照抗体、工业酶、诊断原料等相关产品。
目前已拥有的自主技术包括：哺乳动物细胞重组蛋白表达系统、稳定细胞株构建、噬菌体文库的构建以及淘选、DNA免疫技术、化学发光免疫诊断抗体筛选技术等等。截止目前已成功交付数万例与重组蛋白、抗体相关的技术委托研发，客户以及合作伙伴涵盖了国内外优秀的学术研究机构以及制药公司；并且与FIND（创新诊断基金会）、BAYER（拜耳作物科学）、广州呼吸健康研究院建立合作关系；与青岛大学附属医院医学研究转化中心，苏州系统医学研究所，广州再生医学与健康广东省实验室建立战略合作关系。
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文献和实验- Supramolecular nanofiber-reinforced Puerarin hydrogels as drug carriers with synergistic controlled release and antibacterial properties
- N-(9-Fluorenylmethoxycarbonyl)-L-Phenylalanine/nano-hydroxyapatite hybrid supramolecular hydrogels as drug delivery vehicles with antibacterial property and cytocompatibility
- Response of Bioactive Metabolite and Biosynthesis Related Genes to Methyl Jasmonate Elicitation in Codonopsis pilosula
w_dennis 请教各位高人前辈，有做过基因的部分核苷酸缺失后，回补株构建实验吗？如何操作？ 请教下pBAD/gⅢ和pBR322质粒构建回补株的原理？叩谢！！:) woxingwosu 看看这个有没有帮助了： http://journal.shouxi.net/qikan/article.php?id=534304 w_dennis 谢谢，请问有pBAD/gⅢ和pBR
用慢病毒筛选稳定细胞株，以G418筛选方法为例，筛选出稳定整合Neomycin抗性基因的细胞系。 A 、 G418 抗生素最优浓度筛选 每种细胞对抗生素的敏感性不同，因此，准备建立稳定细胞系之前，需要确定能够在10-14天杀死细胞的最佳浓度。 方法如下 ： 1、将细胞稀释到1000个细胞/mL，接种到24孔板，每孔1ml。 2、接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选。3、每隔3天跟换1次培养液，保持G418浓度不变。 4、选择出
1. 2 稳定转染细胞株的构建 原理： 稳定转染，就是转染的质粒DNA 整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可 长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。 应用： 观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（稳定，可长期进行研究） 一般流程：
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