刚地弓形虫PCR试剂盒

刚地弓形虫PCR试剂盒

Toxophasma gondii

产品及特点

刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种可感染包括人在内所有温血动物 的细胞内寄生原虫，对人畜的危害很大，孕妇感染弓形虫后导致早产、流产、胎 儿发育畸形，是当今致畸胎的四大原因之一，也是免疫功能低下患者死亡的主要 原因（如 AIDS 病人等）。传统的显微镜病原体检查方法，检出率低；以抗体检 测为主的血清学诊断方法不能准确反映弓形虫现时感染情况。PCR 检测技术的发 展为解决这些问题提供了更灵敏的方法。本产品就是以 PCR 技术为基础开发的 专门检测刚地弓形虫的试剂盒，它具有下列特点：  

 

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA。

2. 引物经过优化，灵敏性高。 3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据岗地弓形虫高度保守的、长为 529 bp 的重复序列设 计。

5. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

6. 本产品足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。

7. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

刚地弓形虫PCR试剂盒规格及成分

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0（含染料）	1 mL（亮黄盖）
试剂二	刚地弓形虫 PCR 引物对	100 uL（本色盖）
试剂三	弓形虫基因阳性对照	50 uL（白盖）
试剂四	超纯水	1 mL（蓝盖）
试剂五	天净沙核酸释放剂试用装	20 次（1mL，绿盖）
试剂六	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。

自备试剂 样品 DNA。
 

 

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此 作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。 

二、阳性对照

3、为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体细菌做阳性对 照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 段作为阳性对照。

4、用本试剂盒的阳性对照原液稀释制备阳性对照工作液时，由于阳性对照原液 浓度非常高，一定要注意不要污染本试剂盒的其他试剂和成分。

三、设置 PCR 反应（40uL 体系）

5、对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对 照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
刚地弓形虫 PCR 引物对	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 5 uL
超纯水	各 13 uL	16 uL	18uL
弓形虫基因阳性对照的 10000 倍稀释液	-		2 uL
PCR MagicMix 3.0	各 20 uL	20 uL	20 uL

四、PCR 反应参数 

过程	温度	时间
预变性	94℃	5 min
PCR反应 （35个循环）	94℃	50 sec
	58℃	60 sec
	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

 

 

五、电泳检测

6、取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产 物长度为 212bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增， 否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以 排除 PCR 抑制剂的感染。 

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！