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- 操作流程:取材、固定、包埋、切片……
- 2025年12月03日
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- 文献和实验
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- 提供商：
上海研谨生物
- 服务名称：
碱性磷酸酶染色实验代做
碱性磷酸酶染色实验技术简介:
碱性磷酸酶(AKP) 的显示方法zui早由Gomeri (1939) 提出，现在这种方法称为Gomeri法。碱性磷酸酶是指磷酸单酯酶I,它能在pH8. 6~10.0的zui适条件下分解磷酸单酯，对于与磷酸相接的醇基没有特异性，Gomeri法是让该酶在碱性条件下，分解甘油磷酸钠，产生磷酸根。
碱性磷酸酶染色实验技术原理:
在一定条件下，使细胞中的酶作用于酶的底物，使其产物在原地进行捕捉、沉淀转化为有色产物。细胞组织中的碱性磷酸酶在碱性(PH9.0- 9.6)环境下使作用液中的底物(a- 磷酸萘酚钠)水解，产生出a蔡酚，然后再与偶氮盐偶联，生成不溶性的耐晒染料(zui终产物的颜色因所用偶氮盐的品种不同而有所不同)。
实验操作流程:
1、取材、固定、包埋、切片;
2.取已粘好烘干的切片两块，放入二甲苯(一)→二甲苯(二) (各3-4分钟) 的染缸中进行脱蜡，再经100%乙醇(一)- +100%乙醇(二) - -95%乙醇- -90%乙醇- -70%乙醇- -30%乙醇- +z水。 每级各一分钟，在移切片时，用镊子夹住切片震荡并提起，放下反复几次，在移入下-染缸边緣前稍停留。让溶液滴净后,再入下一染缸，以免把上一染缸溶液过多带入下-染缸，而影响切片质量;
3.将其中一块切片以蜡笔作-标记(用作对照组切片)，放入沸水中煮沸5分钟;
4.将两块切片均放入AKP作用液中孵育30-60分钟，作用液要事先预热到37"C,水浴中进行:
5、取出切片在蒸馏水中洗涤;
6、放入硝酸*钴溶液2-3分钟;
7.蒸馏水冲洗干净，否则切片易被污染，影响定位;
8、切片浸入硫化铵中2-3分钟;
9.蒸馏水冲洗干净;
10.经各级酒精脱水。即30%乙醇- -70%乙醇- -90%乙醇- -950%乙醇- -100%乙醇 (二)- -100%乙醇 (一)，各级一分钟在显微镜下观察，细胞中有黑色沉淀存在的地方，就表明有酶的存在。煮沸的对照切片无黑色沉淀。
实验代做服务：
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文献和实验高。如果有相同的抗原决定簇时，则会有交叉反应。方法成熟，使用广泛的还是经典的组织化学方法。下面以碱性磷酸酶的显示方法来学习经典酶组织化学的理论及操作。经典酶组织化学不是显示酶本身，常采用的方法是：在一定条件下，使细胞中的酶作用于酶的底物，使其产物在原地进行捕捉、沉淀转化为有色产物。碱性磷酸酶（AKP）的显示方法最早由Gomeri（1939）提出，现在这种方法称为Gomeri法。碱性磷酸酶是指磷酸单酯酶Ⅰ，它能在pH8.6~10.0的最适条件下分解磷酸单酯，对于与磷酸相接的醇基没有特异性，Gomeri法
Gomori染色是用于检测细胞中骨型碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase BALP)的一种染色法，具体内容如下： 一、主要试剂准备：PBS、丙酮（或甲醛、95乙醇）、3%β-甘油酸钠、2%巴比妥钠、2�Cl2、2%MgSO4、2%硝酸钴、1%硫化铵（纯的硫化铵也为液体，且由于其有强烈的刺激性味道，建议现配现用） 二、实验步骤： 1、将无菌玻片放在细胞的培养皿中
背景：真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在，研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。与传统的EMSA技术相比，染色质免疫沉淀技术（CHIP）能真实完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白，是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最佳方法。原理：是在活细胞状态下以甲醛固定蛋白质－DNA复合物，超声将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后加入目的蛋白抗体，通过抗体沉淀靶蛋白-DNA复合物，通过洗脱的方法得到富集的靶蛋白-DNA复合物，特异性地富集目的
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