- 询价
- 西格
- XGR16957
- 进口、国产
- 2025年07月12日
7 年钻石会员
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
57
- 英文名：
详见说明书
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
1ml
| 产品名称 | 2X 探针法qPCR Mix （TaqMan探针法荧光定量PCR试剂盒） |
| 规格 | 1ml |
| 货号 | XGR16957 |
2X 探针法qPCR Mix （TaqMan探针法荧光定量PCR试剂盒）方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
| 退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
操作步骤 :
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
产品仅用于科研步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
以下是相关产品：
小鼠凋亡相关因子elisa试剂盒 小鼠凋亡相关因子试剂盒 规格型号：96T/48T 小鼠凋亡相关因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠凋亡相关因子试剂盒、小鼠凋亡相关因子eisa试剂盒 保存条件：2-8℃ 保质期：6个月。 Cyclopropyl 2-fluorobenzyl ketone 150322-73-9 中文名： 分子式：C11H11FO 度：98.0% 关键词：
小鼠凋亡相关因子(mouse Fas) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 Fludarabine 21679-14-1 中文名：氟达拉宾 分子式：C10H12FN5O4
小鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Cyasterone 17086-76-9 中文名：杯苋甾酮 分子式：C29H44O8 度：99.0% 关键词： 川牛膝; 蜕皮甾; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
小鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISAKit ELISA. 96T/48T CTU Guanamine 22535-90-6 中文名： 分子式：C17H26N10O4 度：98.0%
小鼠第八因子相关抗原elisa试剂盒 小鼠第八因子相关抗原试剂盒 规格型号：96T/48T 小鼠第八因子相关抗原试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠第八因子相关抗原试剂盒、小鼠第八因子相关抗原eisa试剂盒 保存条件：2-8℃ 保质期：6个月。 Cyclopropyl 2-fluorobenzyl ketone 150322-73-9 中文名： 分子式：C11H11FO
Deoxycholic acid 中文名：去氧胆酸 分子式：C24H40O4 猪戊型肝炎病毒(HEV)核酸检测试剂盒(-PCR法) 48T
Dehydro-α-lapachone 中文名： 分子式：C15H12O3 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
Dehydrotolvaptan 中文名： 分子式：C26H23ClN2O3 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核酸检测试剂盒(-PCR法) 48T
Dehydroherbarin 中文名： 分子式：C16H14O5 猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
Dehydroepiandrosterone enanthate 中文名：普拉雄酮庚酸酯 分子式：C26H40O3 猪细胞间粘附分子1elisa试剂盒 猪细胞间粘附分子1试剂盒 规格型号：96T/48T
CLIAKitforBeta2-GP1IgA/G/M(MouseBeta2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M)ELISAKit小鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M规格：48T/96T 2-Amino-2'-chloro-5-nitro benzophenone 中文名：2-氨基-5-硝基-2'-氯二苯甲酮 分子式：C13H9ClN2O3
CLIAKitforBeta2-GP1IgA/G/M(HumanBeta2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M)ELISAKit人β2糖蛋白1抗体IgA/G/M规格：48T/96T 2-Acetylfluorene 中文名：2-乙酰芴 分子式：C15H12O
CLIAKitforBeta2-GP1AbIgM(HumanBeta2-Glycoprotein1AibodyIgM)ELISAKit人β2糖蛋白1抗体IgM规格：48T/96T 2-Acetamidothiazole 中文名：2-乙酰氨基噻唑 分子式：C5H6N2OS
CLIAKitforBeta2-GP1AbIgG(HumanBeta2-Glycoprotein1AibodyIgG)ELISAKit人β2糖蛋白1抗体IgG规格：48T/96T 22-Dehydroclerosterol glucoside 中文名： 分子式：C35H56O6
CLIAKitforBeta2-GP1AbIgA(HumanBeta2-Glycoprotein1aibodyIgA)ELISAKit人β2糖蛋白1抗体IgA规格：48T/96T 20-Hydroxyecdysone 中文名：20-羟基蜕皮甾酮 分子式：C27H44O7
小鼠白介素13(IL-13)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Candesartan methyl ester 139481-69-9 中文名： 分子式：C25H22N6O3
小鼠白介素-13 英文名称： ierleukin-13 规格： 48T/96T 英文缩写： IL-13 Cefotaxime 中文名：头孢噻肟钠 分子式：C16H17N5NaO7S2
2X 探针法qPCR Mix （TaqMan探针法荧光定量PCR试剂盒）小鼠白介素-12(mouse IL-12) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 Candesartan ethyl ester 139481-58-6 中文名： 分子式：C26H24N6O3 度：98.0% 关键词：
小鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Candesartan ethyl ester 中文名： 分子式：C26H24N6O3 度：98.0%
小鼠白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Candesartan ethyl ester 中文名： 分子式：C26H24N6O3
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的mix试剂盒。模板有基因组的污染：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。5. 溶解曲线不止一个主峰引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的 mix 试剂盒。模板有基因组的污染：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入，或通过引物设计避免非特异
几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
装备很重要：做出心中的梦中情图，最基本的一步就是拥有一把好用的移液枪，保证其量程是准确的，且每次做 RT-qPCR 的时候要固定使用那一把移液枪，避免造成因枪的不同带来的误差。 保证 RNA 质量：A260/A280要在 2 左右；不同组的样品 cDNA 的浓度也要一致，只有这样你所要扩增的模板的基线才是一致的，后续出来的 CT 值才有参考意义。 反复确认引物种属：很多刚接触实验的小白们，拿着 human 的引物在鼠样本上做 RT-qPCR，，也许跑到天荒地老这个结果也无法得到，既浪费
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
2X 探针法qPCR Mix （TaqMan探针法荧光定量PCR试剂盒）
询价
