第三代免提核酸提取病毒采运试剂盒

产品名称	第三代免提核酸提取病毒采运试剂盒
规格	50次
货号	XGR16934

PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途，下面就向大家介绍PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	5   min	1
变性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
终延伸	72℃	5   min	1

PCR实验步骤
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
操作步骤 :
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
       引物1（10pM）               2μl
       引物2（10PM）              2μl
       Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
以下是相关产品：
小鼠谷酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Deferasirox  201530-41-8  中文名：地拉罗司  分子式：C21H15N3O4 
小鼠谷酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Deflazacort  中文名：地夫可特  分子式：C25H31NO6  度：98.0%
小鼠谷胱甘肽巯基转移酶（GST）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Deferasirox  中文名：地拉罗司  分子式：C21H15N3O4  度：99.0%
小鼠谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Deferasirox  中文名：地拉罗司  分子式：C21H15N3O4 
小鼠谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Deferasirox  201530-41-8  中文名：地拉罗司  分子式：C21H15N3O4  度：99.0%
Diosgenin  512-04-9   中文名：薯蓣皂苷元  分子式：C27H42O3  度：98.0%  关键词：  抗炎; 雌激素剂; 黄山药; 螺甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠17羟孕(17-OHP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           
第三代免提核酸提取病毒采运试剂盒Dioscin  19057-60-4  中文名：薯蓣皂苷  分子式：C45H72O16  度：98.5%  关键词：  溶血; 细胞毒; 抗真菌; 薯蓣属; 螺甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠乳酸脱氢酶   英文名称：   Mouse Lactate Dehydrogenase   规格：   48T/96T   英文缩写：   LDH
Dinitolmide  148-01-6   中文名：二硝托胺  分子式：C8H7N3O5  度：98.0%      小鼠白三烯C4   英文名称：   Mouse Leukoiene C4   规格：   48T/96T   英文缩写：   LTC4
Dimetridazole  551-92-8  中文名：二甲硝咪唑  分子式：C4H5N3O2  度：99.0%      小鼠脂蛋白酯酶   英文名称：   Mouse Lipopeinlipase   规格：   48T/96T   英文缩写：   LPL
Dimethylolurea  140-95-4  中文名：双羟甲脲  分子式：C3H8N2O3  度：98.0%      小鼠白三烯   英文名称：   Mouse leukoiene   规格：   48T/96T   英文缩写：   LT3
Dabigatran etexilate  中文名：  分子式：C34H41N7O5    猪生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
D(-)-Arginine  中文名：D-精氨酸  分子式：C6H14N4O2    猪内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
Cyromazine  中文名：环丙氨嗪  分子式：C6H10N6    猪内皮细胞生长因子A（VEGF-A）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装        
Cyproterone acetate  中文名：醋酸环丙氯地孕酮  分子式：C24H29ClO4    猪生成素2elisa试剂盒   猪生成素2试剂盒   规格型号：96T/48T   ，
Cyproheptadine   中文名：盐酸赛庚啶  分子式：C21H22ClN    猪生成素1elisa试剂盒   猪生成素1试剂盒   规格型号：96T/48T   x
小鼠层连蛋白elisa试剂盒   小鼠层连蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠层连蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠层连蛋白试剂盒、小鼠层连蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。     Drospirenone  67392-87-4  中文名：屈螺酮  分子式：C24H30O3 
小鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Cinnamyl 3-aminobut-2-enoate  中文名：  分子式：C13H15NO2  度：98.0%
小鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Cinnamyl 3-aminobut-2-enoate  113898-97-8  中文名：  分子式：C13H15NO2  度：98.0%  关键词： 
小鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Cinnamyl 3-aminobut-2-enoate  中文名：  分子式：C13H15NO2 
小鼠补体片断elisa试剂盒   小鼠补体片断试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠补体片断试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠补体片断试剂盒、小鼠补体片断eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Ciprofloxacin   中文名：盐酸环丙沙星  分子式：C17H19ClFN3O3  度：98.0%
小鼠谷酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Deferasirox  201530-41-8  中文名：地拉罗司  分子式：C21H15N3O4 
小鼠谷酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Deflazacort  中文名：地夫可特  分子式：C25H31NO6  度：98.0%
小鼠谷胱甘肽巯基转移酶（GST）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Deferasirox  中文名：地拉罗司  分子式：C21H15N3O4  度：99.0%
小鼠谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Deferasirox  中文名：地拉罗司  分子式：C21H15N3O4 
小鼠谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Deferasirox  201530-41-8  中文名：地拉罗司  分子式：C21H15N3O4  度：99.0%
Diosgenin  512-04-9   中文名：薯蓣皂苷元  分子式：C27H42O3  度：98.0%  关键词：  抗炎; 雌激素剂; 黄山药; 螺甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠17羟孕(17-OHP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           
Dioscin  19057-60-4  中文名：薯蓣皂苷  分子式：C45H72O16  度：98.5%  关键词：  溶血; 细胞毒; 抗真菌; 薯蓣属; 螺甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠乳酸脱氢酶   英文名称：   Mouse Lactate Dehydrogenase   规格：   48T/96T   英文缩写：   LDH
Dinitolmide  148-01-6   中文名：二硝托胺  分子式：C8H7N3O5  度：98.0%      小鼠白三烯C4   英文名称：   Mouse Leukoiene C4   规格：   48T/96T   英文缩写：   LTC4
Dimetridazole  551-92-8  中文名：二甲硝咪唑  分子式：C4H5N3O2  度：99.0%      小鼠脂蛋白酯酶   英文名称：   Mouse Lipopeinlipase   规格：   48T/96T   英文缩写：   LPL
Dimethylolurea  140-95-4  中文名：双羟甲脲  分子式：C3H8N2O3  度：98.0%      小鼠白三烯   英文名称：   Mouse leukoiene   规格：   48T/96T   英文缩写：   LT3
Dabigatran etexilate  中文名：  分子式：C34H41N7O5    猪生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
D(-)-Arginine  中文名：D-精氨酸  分子式：C6H14N4O2    猪内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
Cyromazine  中文名：环丙氨嗪  分子式：C6H10N6    猪内皮细胞生长因子A（VEGF-A）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装        
Cyproterone acetate  中文名：醋酸环丙氯地孕酮  分子式：C24H29ClO4    猪生成素2elisa试剂盒   猪生成素2试剂盒   规格型号：96T/48T   ，
Cyproheptadine   中文名：盐酸赛庚啶  分子式：C21H22ClN    猪生成素1elisa试剂盒   猪生成素1试剂盒   规格型号：96T/48T   x
小鼠层连蛋白elisa试剂盒   小鼠层连蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠层连蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠层连蛋白试剂盒、小鼠层连蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。     Drospirenone  67392-87-4  中文名：屈螺酮  分子式：C24H30O3 
小鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Cinnamyl 3-aminobut-2-enoate  中文名：  分子式：C13H15NO2  度：98.0%
小鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Cinnamyl 3-aminobut-2-enoate  113898-97-8  中文名：  分子式：C13H15NO2  度：98.0%  关键词： 
小鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Cinnamyl 3-aminobut-2-enoate  中文名：  分子式：C13H15NO2 
小鼠补体片断elisa试剂盒   小鼠补体片断试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠补体片断试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠补体片断试剂盒、小鼠补体片断eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Ciprofloxacin   中文名：盐酸环丙沙星  分子式：C17H19ClFN3O3  度：98.0%

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
第三代免提核酸提取病毒采运试剂盒(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。