Firefly & Renilla双荧光素酶报告基因检测试剂

       萤火虫荧光素酶是一种分子量约为61 kD 的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化Luciferin 氧化成Oxyluciferin，在Luciferin 氧化的过程中，会发出生物荧光(Bioluminescence)。海肾荧光素酶是一种分子量约为36 kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化Coelenterazine 氧化成Coelenteramide，在Coelenterazine 氧化的过程中也会发出生物荧光。生物荧光可以通过化学发光仪(Luminometer)或液闪测定仪进行测定。



在 DLR 检测中，萤火虫（Firefly）荧光素酶和海肾（Renilla）荧光素酶的活性可在单个样品中依次检测。先是先以荧光素(Luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)，后以肠腔素(Coelenterazine)为底物来检测海肾荧光素酶(Renilla Luciferase)，并在后续加入海肾荧光素酶底物时，同时加入抑制萤火虫荧光素酶催化Luciferin发光的物质，使后续检测仅仅检测到海肾荧光素酶的活性，实现双荧光素酶报告基因检测。通过荧光素酶和其底物这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5' 启动子区克隆在Luciferase 的上游，或把3'-UTR 区克隆在Luciferase 的下游等，构建成报告基因(Reporter Gene)质粒，然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。 Renilla Luciferase 相对更多地被用作转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异。
Firefly & Renilla双荧光素酶报告基因检测试剂盒具有检测迅速、灵敏度高、检测范围广，无细胞内源活性干扰等特点。

订购信息

试剂盒组分

保存方法
蓝冰运输。-20℃保存，有效期12个月。
【注】：C组分建议预先使用B组分配制为2 mg/mL储液，B组分、D组分及配制为储液的C组分，根据实验需求进行小批量分装。所有检测工作液建议现配现用，避免反复冻融。
注意事项
 1. 为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制一致；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫荧光素酶检测试剂。
 2. 由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定
 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。