双荧光素酶报告基因检测试剂盒

凯基双萤光素酶报告基因检测试剂盒(Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是先以萤光素 (luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)，后以肠腔素(coelenterazine)为底物 来检测海肾萤光素酶(Renilla luciferase)，并且在后续加入海肾萤光素酶底物时，同时加入抑制萤火虫 荧光素酶催化 luciferin 发光的物质，使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性，实现双萤光素酶报 告基因检测。 萤火虫萤光素酶是一种分子量约为 61kD 的蛋白，在 ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化 luciferin 氧化成 oxyluciferin，在 luciferin 氧化的过程中，会发出生物萤(bioluminescence)。海肾 萤光素酶是一种分子量约为 36kD 的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化 coelenterazine 氧化成 coelenteramide，在 coelenterazine 氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪 (luminometer)或液闪测定仪进行测定。 萤火虫萤光素酶催化 luciferin 发光的最强发光波长为 560 nm。海肾萤光素酶催化 coelenterazine 发光的最强发光波长为 465 nm。 通常将目的基因的 5´UTR 或者启动子克隆至 Firefly Luciferase 的上游，或者 3´UTR 克隆至 Firefly Luciferase 的下游，通过检测萤火虫荧光素酶的量来检测启动子或者调控元件的转录调控作用。Renilla Luciferase 作为内参，来消除细胞数量或者转染效率的差异。
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