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- 2025年12月31日
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Recombinant Proteinase K
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文献和实验蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到。该酶有两个ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消化过程中通常加入edta（以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用
[ 实验目的 ] 通过本实验学习 PCR 反应的基本原理与实验技术。 通过本实验学习重组质粒的检测技术。 [ 基本原理 ] 聚合酶链反应（ polymerase chain reaction ， PCR ）是体外酶促合成特异 DNA 片段的一种技术。在待扩增的 DNA 片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后， DNA 扩增 2 n 倍。 PCR 进行的基本条件是： （ 1 ）以 DNA 为模板（在 RT － PCR 中模板是 RNA ）； （ 2 ）以寡核苷酸
蛋白酶 K，威力巨大的广谱蛋白酶，95C 加热10 分钟，则完全失活。数年前首次使用它，是替代 DEPC 处理 RNA 抽提用的离心管和枪头，效果不错；后来又用于处理 RNase-Free的水，效果也是一级棒。从此就再也不用 DEPC 了。现在将它的细节公开，与大家分享。 配制 RNA 裂解试剂时，直接用灭菌的双蒸水配制，最后，加入蛋白酶 K 至终浓度 1ug/ml。轻轻混匀，室温放置 15 分钟后即可。枪头及离心管去除 RNase：先将枪头及离心管清洗干净后，移入预先混好的含 1ug
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