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卡萨诺尔森林病病毒RT-LAMP试剂盒

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  • ¥3990
  • 沪震生物
  • HZ96-74400
  • 中国
  • 2025年07月15日
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    • 详细信息
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      88

    • 英文名

      Kyasanur Forest Disease Virus(KFDV)

    • 保质期

      一年

    • 供应商

      上海沪震实业有限公司

    • 保存条件

      -20℃

    • 规格

      50次

    卡萨诺尔森林病病毒PT-LAMP试剂盒
    Kyasanur Forest Disease Virus(KFDV)
    产品及特点
    卡萨诺尔森林病病毒(African Swine Fever、ASF)是由卡萨诺尔森林病病毒(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病,病死率几乎高达100%,ASF最近在我国爆发,给我国养猪业造成重大损失,因此ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用,为此本公司开发了简单快捷的 ASFV 可视化 LAMP 检测试剂盒,它具有下列特点:
    1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA。
    2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增 ASFV 特异片段,不需要荧光 PCR 等贵重仪器。 同时扩增时间只需要1小时,尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。
    3. 检测灵敏性比PCR高10倍以上。
    4. 特异性高,由于使用四条针对ASFV保守基因的特异引物,比使用2条引物的PCR专一性更高。
    5. 提供无传染性的阳性对照,便于分析实验结果。
    6. 每个反应的线性范围:10E2-10E7 拷贝/μL,最低灵敏度:10 拷贝/μL。
    7.本试剂盒足够做50次 20μL体系的LAMP扩增。本产品只能用于科研。
    规格及成分
    成份 编号 十孔盒包装
    2×可视化 UNG-LAMP MagicMix 试剂一 500μL(绿盖)
    卡萨诺尔森林病病毒 LAMP 引物混合液 试剂二 200μL(白盖)
    卡萨诺尔森林病病毒LAMP阳性对照
    (1×10E8 拷贝/μL)
    试剂三 50μL(黄盖)
    使用手册 试剂四 一份
    运输及保存:低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。MRSALAMP 阳性对照最好单独放置,不要污染其他试剂。
    自备试剂:待测样品。
    使用方法 一、样品 DNA 的制备
    1. 用自选方法纯化细菌样品 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容,包括本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout,可去公司的官网搜索。
    2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个样品制备,包括一个样品制备阳性对
    照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL,则在XmL水中加10μLMRSA LAMP阳性对照的10000倍稀释液作为样品制备阳性对照,样品制备阴性对照是直接用X mL水作为阴性对照,然后和N个样品一起进行细菌DNA提取操作,得到N+2个DNA样品。
    二、LAMP(20μL 体系)
    3. 反应设置:如果有N+2个DNA纯化样品,则最好设置N+4个LAMP扩增,增加 LAMP阴性对照和阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分:
    成分 N+2个样品管 LAMP阴性对照管 LAMP阳性对照管
    2 ×可视化
    UNG-LAMP MagicMix
    各10μL 10μL 10μL
    卡萨诺尔森林病病毒LAMP
    引物混合液
    各 4 μL 4 μL 4 μL
    N+2 个样品 DNA 各 6 μL -- --
    LAMP 阴性对照(水)   6μL  
    LAMP 阳性对照(卡萨诺尔森林病病毒LAMP阳性对照的 100倍稀释液) -- -- 6μL
    4. 混匀,此时反应液呈现非常浅的蓝色,由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比,所以一定要设置阴性对照,并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。
    5. 置于 25℃5 分钟(让 UNG 灭活可能的LAMP的污染),然后放 63℃扩增60 分钟。如果是在 PCR 仪中保温,必须加热盖。如果用金属浴保温,没有热盖,必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙,并且在管中加50uL石蜡油,否则保温期间反应体系的水分会蒸发,影响反应效率)。
    6. 80℃10 分钟灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。
    7. 将反应管放置在白色背景(如白纸)前观察,观察反应液颜色并用手机照相留底。
    8.实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色,无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色,样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增,如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图(9号为阴性,10号为阳性,此处的9号和10号跟下步的电泳照片中的9号和10号是相同的两个样品):

    产品细节图片1
    9.如果需要也可以电泳确认实验结果:取 10μL LAMP 扩增产物直接进行2%琼脂糖凝胶电泳(本产品不需要单独加 loading buffer),最好使用100 bpDNA Marker。如果样品为阳性,将会得到长度为 200bp 的梯形扩增产物。典型的电泳结果见下图(奇数样为阴性结果,偶数样为阳性结果。此处的9号和10号跟上步照片中的9号和10号是相同的两个样品)。
    产品细节图片2
    10. 注意消除环境污染,LAMP 产物易产生气溶胶,飘在空气中影响下一次实验,建议反应结束后,用紫外灭菌。先加好除阳性对照和样品以外的其它溶液,到另一个房间添加阳性对照及样品,可有效防止引物、MagicMix被污染
    特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

     

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