猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)

猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)

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  • 2025年11月03日
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      -20℃

    • 保质期

      6个月

    • 英文名

      Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) nucleic acid assay kit (RT-PCR)

    • 库存

      10

    • 供应商

      沪震生物

    • 规格

    猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)扩增效率的问题实际就是引物的扩增效率,可能酶活的关系没有那么重要,前提是试剂盒的质量有保证。回到扩增效率,只有在引物和模板处于最适比例时才能得到比较满意的扩增效率,因此通过调节PCR反应体系中的引物终浓度来解决,可以做一些引物梯度来比较。
    【包装规格】24/50/96测试/盒
    【类别】PCR-荧光试剂盒
    【运输】低温、避光、快递免费送货上门。
    【用途】生化实验,合成实验等试验。
    猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)常见问题:
    一.没有扩增产物
    1.循环温度:变性温度、退火温度
    2.引物设计
    3.DNA聚合酶活性
    4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
    5、DNA样品
    二.非特异产物及电泳呈涂布状
    1.Mg2 浓度
    2.调整引物、模板、聚合酶的用量
    3.适当减少循环数
    4.适当提高退火温度,缩短退火或延伸时间
    QQ图片20170717123731
    猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)的改进与完善:
    Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段,其缺点是:
    ①Klenow酶不耐高温,90℃会变性失活,每次循环都要重新加,每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期,给PCR技术操作程序添了不少困难。
    ②引物链延伸反应在37℃下进行,容易发生模板和引物之间的碱基错配,其PCR产物特异性较差,合成的DNA片段不均一。
    2)1988年初,Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR,其扩增的DNA片段很均一,真实性也较高,只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次,仍需加入新酶。
    3)1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶。猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)此酶具有以下特点:
    ①耐高温,在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%,在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%,在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。
    ②在热变性时不会被钝化,不必在每次扩增反应后再加新酶。
    ③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率,增加了扩增长度(2.0Kb)。由于提高了扩增的特异性和效率,因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶I Klenow片段区别,将此酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。

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