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-20℃
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6个月
- 英文名:
Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) nucleic acid assay kit (RT-PCR)
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10
- 供应商:
沪震生物
- 规格:
次
【包装规格】24/50/96测试/盒
【类别】PCR-荧光试剂盒
【运输】低温、避光、快递免费送货上门。
【用途】生化实验,合成实验等试验。
猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)常见问题:
一.没有扩增产物
1.循环温度:变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
1.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度,缩短退火或延伸时间
猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)的改进与完善:
Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段,其缺点是:
①Klenow酶不耐高温,90℃会变性失活,每次循环都要重新加,每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期,给PCR技术操作程序添了不少困难。
②引物链延伸反应在37℃下进行,容易发生模板和引物之间的碱基错配,其PCR产物特异性较差,合成的DNA片段不均一。
2)1988年初,Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR,其扩增的DNA片段很均一,真实性也较高,只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次,仍需加入新酶。
3)1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶。猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)此酶具有以下特点:
①耐高温,在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%,在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%,在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。
②在热变性时不会被钝化,不必在每次扩增反应后再加新酶。
③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率,增加了扩增长度(2.0Kb)。由于提高了扩增的特异性和效率,因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶I Klenow片段区别,将此酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。
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文献和实验猪流行性腹泻病毒(PEDV )抗体 酶联免疫 分析( ELISA ) 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于检测猪血清,血浆及相关液体样本中流行性腹泻病毒(PEDV)抗体水平,感染猪的血液学诊断。 实验原理 : 本试剂盒 采 用双 抗原 夹心 酶联免疫 法 (ELISA ) 测定 标本 中 猪流行性腹泻病毒(PEDV )抗体 。用纯化的 猪流行性腹泻病毒(PEDV ) 抗原 包被微孔板,制成固相
H2 SO4 ):浓硫酸22.2ml、蒸馏水177.8ml。 7. 猪流行性腹泻(PED)抗原:PEDV猪胎肠原代细胞培养物,反复冻融,65℃ 30min灭活。最后以3 000 r/min离心30min,取上清分装,-20℃保存备用。抗原的蛋白浓度为300μg/ml。 8. 酶标兔抗猪抗体结合物:酶结合物效价为1∶10 000。 9. 被检猪血清:采自疫区猪和病猪。PEDV免疫猪血清及健猪血清分别用于阳性、阴性对照。 实验
一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
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