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- 2025年12月03日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海研谨生物
- 服务名称：
石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光
服务名称: 石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光
规格: 实验服务
周期： 1-2周
价格： 15元
收费标准/服务周期/提供结果:
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石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光
TUNEL凋亡荧光实验原理
dUTP缺口末端标记(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling，TUNEL) 法检测细胞凋亡的原理是当细胞发生凋亡时,DNA内切酶被激活，核小体间的基因组DNA被切断，暴露的3-0H可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TerminalDeoxynucleotidyl Transferase, TdT)加上带有荧光素FITC标记的dUTP,从而可以通过荧光显微镜进行检测。
TUNEL凋亡荧光实验意义
1.TUNEL法是一种分子生物学与形态学相结合的研究方法，可对完整的单个凋亡细胞或者凋亡小体进行原位染色，可以准确反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征。
2.可用于石蜡切片、冰冻切片、培养的细胞等进行细胞凋亡检测，灵敏度远比一般的组织化学和生物化学方法要高。
3.操作简便快捷，在细胞凋亡的研究中被广泛采用。
TUNEL凋亡荧光实验步骤:
1.石蜡切片TUNEL显色法:
①石蜡切片常规脱蜡至水，脱蜡剂= =甲苯，至水剂乙醇;
②PBS漂洗3*5 min; .
③加入蛋白酶K工作液379C反应15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
④4%多聚*甲*醛(pH7 4的PBS)室温固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入封闭液(3%H202)室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑥参考使用试剂盒的说明书配制适量的TUNEL检测液，其中含有TdT酶、荧光标记液、TUNEL检测液;
⑦样品上加入适量TUNEL检测液，37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧选择是否用DAPI复染细胞核;
⑨使用抗荧光淬灭封片液封片后在荧光显微镜下进行观察。
2.冰冻切片TUNEL显色法:
①新鲜组织经处理后，立即在恒冷冰冻切片机内切片，厚度为5~6 um;
②防脱玻片，贴片，室温阴干约12h;③4%多聚*甲*醛(pH7 .4的PBS)室温固定10 min,
PBS漂洗3x5 min;
④浸入封闭液(3%H20O2) 室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入通透液(0.1%Triton X-100溶于PBS中)，室温通透30 S-2 min;
⑥参考使用试剂盒的说明书配制适量的TUNEL检测液，其中含有TdT酶、荧光标记液、TUNEL检测液;
⑦样品上加入适量TUNEL检测液，37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧选择是否用DAPI复染细胞核:
⑨使用抗荧光淬灭封片液封片后在荧光显微镜下进行观察。
结果展示
实验完成周期及交付标准
1.实验周期: 1-2周
2.交付标准:蜡块、切片、染色图片.实验报告(实验步骤、试剂、耗材等)
需确认的信息
1.样本的种属
2.样本的类型(固定的组织or蜡块or切片)
3.是否提供试剂盒
4.拍照要求
动物模型构建服务
免疫荧光染色实验服务
实验代做服务：
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文献和实验【整理】如何降低石蜡冰冻切片，免疫荧光背景和自发荧光，国外专家的做法
做组织切片的免疫荧光染色，最头疼的问题之一就是背景荧光。自然情况下，很多有机物都有自发荧光的属性，更别提生物组织，所以不论是石蜡切片，还是冰冻切片一样存在背景荧光的问题。解决的方法有很多：1.使用共聚焦显微镜，成像会比一般荧光显微镜要好一些2.使用纯光谱计算方法（compute pure spectrum，CPS）的CCD，如Nuance FX MSI ，可以通过复杂的计算扣掉背景质，当然这都是软件完成的。3.以上方法各有优劣，1在于断层扫描，2在与成像质量更好，但是二者均很贵，对于普通实验
速冻组织 将组织块平放于软塑料盖或特制小盒内（直径2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮内，大约10-20秒组织即迅速冰冻成块。取出组织冰块立即置入-80℃冰箱储存备用，或置于恒冷切片机冰冻切片。 冰冻切片4~8mm，冰冻切片后如不染色，必须吹干，储存低温冰箱内，或进行短暂预固定后储存冰箱内保存。 室温放置30分钟
0-G1期峰的一个峰，死亡的细胞峰离G0-G1期峰较远，但是这种典型的结果似乎很难获得。有其它的替代方法，完全可以不用这种方法。晚期凋亡的细胞由于DNA的断裂，因而可以出现DNA ladder，从而也就有了经典的检测方法TUNEl。流式也能进行Tunel检测，其检测原理与经典Tunel原理基本一致。以BD公司的为例，其利用TdT能将荧光素标记的dUTP标记到断裂的DNA末端，从而使凋亡的细胞具有荧光。但是由于在细胞内标记，细胞需要进行固定处理，操作类似免疫组织化学法，容易造成假阳性。建议采用原装大厂
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