- ￥500
- 组织不少于100mg (约绿豆大小)
- 2026年04月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海研谨生物
- 服务名称：
凋亡因子Caspase-389实验代做
服务名称: 凋亡因子Caspase-389实验
规格: 实验服务
价格： 500元
周期： 10天左右
收费标准/服务周期/提供结果:
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凋亡因子Caspase-389检测实验
Caspase3
Caspase是- -个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也称CPP32, 是细胞凋亡过程中的一个关键酶，可以剪切procaspase2.6. 7和9，并可以直接特异性剪切许多caspase底物，包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase), ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease), gelsolin和fodrin等。 这些由caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用，包括染色质固缩，DNA片段化等。同时caspase 3对细胞起泡(Cell blebbing)也起到关键作用。
检测原理基于casepase 3可以催化底物AC-DEVD-pNA产生黄色的pNA(-itroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 3的活性。pNA在405nm附近有强吸收。参照黄色产物pNA制作的标准曲线，可以作为定量caspase 3酶活性的标准品。
Caspase-8
Caspase 8通常以酶原的形式存在，在细胞凋亡的信号转导过程中被激活，Caspase 8被认为是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase,在Fas-receptor和TNFR-1介导的细胞凋亡 过程中caspase 8被激活,形成一个由p18和p10组成的二聚体，进一步激活下游的caspase 4, caspase 6。caspase 9和caspase 10。本方法基于Caspase 8可以催化底物AC-IETD-pNA产生黄色的pNA (-nitraniline),从而可以通过测定吸光度来检测Caspase 8的活性。pNA在405nm附近有强吸收。 检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线，可以计算样品的Caspase 8酶活性。
Caspase-9
Caspase 9也称ICE-LAP6或Mch6,是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase。线粒体释放细胞色素c以后，caspase 9可以和细胞色素c以及Apaf1形成复合物，同时被激活。激活的caspase 9可以激活细胞凋的最关键酶caspase 3,从而促进后续的细胞凋亡信号。Caspase 9的激活可以通过磷酸化进行调控。
本方法基于Caspase 9可以催化底物Ac- LEHD -pNA产“生黄色的pNA (p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测
Caspase 9的活性。pNA在405nm附近有强吸收。检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线，可以计算样品的Caspase 9酶活性。
Caspase1
Caspase2
Caspase4
Caspase6
凋亡因子Caspase 3/8/9检测样本准备:
1)细胞样品:取1x107个细胞(约1个T25的培养瓶细胞量) , 600g 4°C离心5分钟收集细胞，小心吸除上清，PBS洗涤一次。吸取上清后，每管细胞样品加入100u|裂解液重悬沉淀,冰浴裂解15分钟。4°C 16,000g离心10-15分钟， 把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70°C保存样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度，尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml.
2)组织样品:约每10mg组织加入100ul裂解液，在冰浴上用玻璃匀浆器匀浆。然后把匀浆液转移到1 .5ml)离心管中，冰浴再裂解5分钟。4°C 16,000g离心10-15分钟，把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70°C保存
样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度，尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml.
Caspase-3活性检测标准曲线
实验周期: 7-10个工作日内完成，重复检测优惠。
客户注意事项
1.抗体:事先咨询上海研谨生物，明确抗体种属以及是否有该抗体可使用。如无可由双方协商而定，客户自己购买提供或我公司代购;
2.标本收集与保存:
①组织样品:新鲜组织放入液氮或-70度保存,组织不少于100mg (约绿豆大小) ;
②培养细胞:通过细胞计数取不少于000000个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱(-70°C，避免反复冻融) ;
③血液细胞标本:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，保存(-70°C可长期保存，避免反复冻融)
④血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP管，保存(以上4°C可保存15-20天，-70°C可长期保存，避免反复冻融)
3、样本运输:可选以下任何的一种方式寄送标本
①组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后加冰袋运输;
②细胞样本也可以直接快件寄送培养瓶(密封保证不污染，培养液不漏出,细胞不要长得太满，50%左右,灌满培养液) ;
③血清或上清液直接加冰袋寄送(密封保证液体不漏出，视路途远近2-3天可到达)。
免疫共沉淀（CHIRP）实验服务
PKC活性检测实验
实验代做服务：
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文献和实验发光基团pNA游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1．准备工作： A、 裂解液溶解后混匀，冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备：每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT，冰浴备用。 2．样本处理： A、悬浮细胞 1） 诱导完成后的细胞，2000 rpm离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS轻轻重悬细胞并计数
【求助】caspase-3抗体与激活型caspase-3抗体
环佩从容 要做下一步实验啦，这两个抗体选哪个呀，目前研究有没有区分哪一个更好点啊 ronaldo_zj 楼主您好。 1. 楼主需要知道Pro caspase-3以及Cleaved caspase-3的功能以及检测手段，不是说哪个好那个不好的问题，而是根据你的课题需要检测何种片段的问题。请楼主先具体查阅关于caspase活化的文献后再定好实验计划； 2. 目前多数研究均认为Cleaved
各自的一个变化情况，还有关于你说的推断线粒体通路激活的判断不成立吧，明显证据不充分，还有这样的实验要多次重复哦 玛利乐乐 redbri wrote: 楼上说的cyt c的检测有道理，应该要有线粒体和胞浆各自的一个变化情况，还有关于你说的推断线粒体通路激活的判断不成立吧，明显证据不充分，还有这样的实验要多次重复哦 那如果线粒体中的cytc减少，胞浆中增多，而且Bid下调，caspase-9下调，能不能推断
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