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500g
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文献和实验Glycogen can conveniently substitute for tRNA as a carrier for nucleic acid precipitation. Although Molecular Biology grade glycogen can be purchased from a number of vendors, the main disadvantage is that it is very expensive (e.g
Staining of Preparative 2-D Gels: Coomassie Blue and Imidazole-Zinc Negative Staining
-250 or negative staining with imidazole-zinc yields high-resolution stains (Fig. 1 ) that are compatible with subsequent mass spectrometric analysis ( see Notes 1 and 5 ). Fig. 1. Preparative 2-D gels stained by the imidazole-zinc
行 HIS 标签的捕获。 2、HIS标签蛋白结合了,但是洗脱不充分 原因一 洗脱条件太温和。 建议 增加咪唑的浓度或选择咪唑线性梯度洗脱,或者通过降低 pH 寻找最佳洗脱条件。需要注意的是,pH 低于 3.5 容易导致镍离子脱落。 原因二 蛋白柱上沉淀。 建议 1 降低蛋白浓度。可以减少上样量,或者采用咪唑线性而非步级梯度洗脱,增加蛋白稀释度。 建议 2 试用去污剂或者改变 NaCl 的浓度,或者使用变性剂 (4-6M 盐酸胍或 4-8M 尿素) 在变性条件下洗脱。 原因三 非特异性的疏水或者其他相互
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