SDS细胞裂解液

中文名:SDS细胞裂解液

英文名:SDS Lysis Buffer

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:2-8℃

产品简介

产品简介：

    的SDS裂解液(SDS Lysis Buffer)是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常 规的Western、ChIP(染色质免疫共沉淀，chromatin immunoprecipitation)等。

    用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品，可选用本公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于SDS裂解液含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本产品裂解得到样品的蛋白浓度。 

    SDS裂解液含多种蛋白酶抑制剂。可以有效抑制蛋白降解，但需避免反复冻融。

 

使用方法

对于培养细胞样品： 

1. 融解SDS裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 

2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。 

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。 

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。如果用于ChIP，建议6孔板每孔细胞至少加入200微升裂解液。每100万细胞用100微升本产品裂解后获 得的上清，其蛋白浓度约为2-4mg/ml，不同细胞有所不同。 

对于组织样品： 

1. 把组织剪切成细小的碎片。 

2. 融解SDS裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 

3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。 

5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。 

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。 

注意事项： 

1.为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。购买后可以适当分装后使用。  

2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3.关于裂解液的选择，一方面可以参考我们提供的裂解液成分、特点进行选择，另一方面也需要通    过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。 

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！