- ￥1398
- 泽叶生物
- ZY2401-200T
- 中国
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Super酵母转化试剂盒（酿酒酵母专用）Super酵母转化试剂盒（酿酒酵母专用）
- 保质期：
RT
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
200T
储存条件：-20 ℃保存，未开封有效期24个月。Y3避免多次冻融；Y1、Y2溶液可2-8 ℃保存。
产品内容：
产品说明：
Super酵母感受态制备与转化试剂盒（ZY2401）可以完成酿酒酵母感受态制备，感受态冻存，转化实验。最突出的优点可一次性制备200支感受态，-80 ℃冰箱可冻存一年，后续酵母转化实验无需重新制备感受态，操作简单快速，该试剂盒的转化效率与经典酵母转化试剂盒（ZY2400）基本相同。如需进一步提高酵母转化效率，可选用Super酵母感受态制备与转化试剂盒Plus（ZY2402）或单独购买YPD Plus Liquid Medium（ZY0004），转化产物用YPD Plus复苏，其转化效率可以提高50-100%。
使用方法：
感受态细胞的制备：（按小体积转化制备20支感受态计，可按比例扩大）
1.活化菌种。-80 ℃保存的菌种在YPDA培养基平板上划线，30 ℃培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线，30 ℃培养2-4天。
3.待酵母单菌落直径长至2 mm时，把酵母细胞接种到3 mL液体YPDA培养基中，30 ℃过夜培养。
4.第二天转接到含有50 mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600达到0.4-0.5，3000 rpm离心5 min，弃上清。（4 ℃保存1周内的酵母菌液，用3 mL接种50 mL YPDA培养基过夜培养）
5.用10 mL Y1溶液重悬沉淀，3000 rpm离心5 min，弃上清。
6.加入1 mL Y2溶液重悬，按50 μL分装于1.5 mL无菌冻存管，转文库按600 μL分装，感受态细胞即制备完毕，可直接用于转化。
7. 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后，再置于-80 ℃冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒，或用
多层纸包裹放入泡沫盒中，先置于-80 ℃冰箱过夜后，再取出感受态置于-80 ℃冰箱，可保存一年。使用前室温融化后用于转化。
转化预混液配制：
酵母质粒转化：
1.吸取360 μL预混液加入50 μL感受态细胞中，反复吹吸沉淀，使酵母细胞完全悬浮于预混液中。
2.30 ℃的水浴锅中热激60 min，每10 min混匀一次。对于部分菌种，延长孵育时间可提高转化效率，但不要超过3小时。
3.12,000 rpm离心15 s，弃上清。
4.（可选步骤）用1 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀，30 ℃摇床震荡培养30-60 min。12000 rpm离心15 s，弃上清。
5.加入400 μL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板，30 ℃培养2-4天。
酵母文库转化：（需用15-50 mL离心管）
1.将2450 μL预混液加入到600 μL感受态细胞中，震荡使感受态细胞充分悬浮于预混液中。
2.30 ℃的水浴锅中热激90 min，每10 min混匀一次。对于部分菌种，延长孵育时间可提高转化效率，但不要超过3小时。
3.3000 rpm离心5 min，弃上清。
4.（可选步骤）用3 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀，30 ℃摇床震荡培养90 min，3000 rpm离心5 min，弃上清。
5.加入15 mL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板，30 ℃培养2-4天。
注意事项：
1. 转化全程要求无菌操作。
2. 为了保证转化效率，务必缓慢冻存感受态，感受态不宜直接用液氮冻存。
3. 增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。
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分子生物学技术的发展为利用生物反应器生产外源蛋白提供了许多方法和手段。到目前为止，已发展出了大肠杆菌、酵母、昆虫、哺乳动物细胞等多种蛋白表达系统，其中酵母表达系统是最近发展起来的新型表达系统。最先使用的是酿酒酵母，1981年Hitzeman等用酿酒酵母成功地表达了人干扰素，但该系统具有一定的局限性，缺乏强有力的启动子，分泌效率差，质粒不稳定等。因此，人们在此基础上又寻找了新的酵母表达系统——毕赤酵母，即甲醇营养型表达系统。目前该表达系统被广泛应用，但由于缺乏对毕赤酵母表达系统的全面认识，在生产
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