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- CreERT，他莫昔芬（tamoxifen），loxP，小肠（small intestine）
- 2026年01月30日
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杰克森实验室
| 系统命名：B6.129P2-Lgr5tm1(cre/ERT2)Cle/J 普通命名：Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 品系货号：008875 (https://www.jax.org/strain/008875) 品系来源： 该品系由Hubrecht Institute的Hans Clevers 博士捐赠。 原始参考文献为 Barker N; van Es JH; Kuipers J; Kujala P; van den Born M; Cozijnsen M; Haegebarth A; Korving J; Begthel H; Peters PJ; Clevers H. 2007. Identification of stem cells in small intestine and colon by marker gene Lgr5. Nature 449(7165):1003-7 PubMed: 17934449 MGI: J:12712 品系描述： 虽然纯合小鼠不能存活，但是 Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2 杂合小鼠可存活且可繁育；携带 Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2“基因敲入”等位基因，破坏了内源 Lgr5 (Gpr49) 基因功能，并表达了来自 Lgr5 启动子/增强子驱动的 EGFP 和 CreERT2 融合蛋白。在小肠隐窝基底柱状细胞（也称为小肠干细胞）和结肠中观察到 EGFP 荧光。Cre-ERT2 融合基因活性可诱导；仅在给予他莫昔芬后的相同细胞中观察到。也可在其他表达 Lgr5 的细胞类型（包括癌前小鼠腺瘤、结肠癌细胞、胃腺上皮干细胞、乳腺基底上皮层干细胞和毛囊干细胞）中观察到 EGFP 或可诱导的 CreERT2 表达。 捐赠者报道了 Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2 转基因在小肠和结肠中多样化的表达（在小肠发育早期表达的基因经常出现的情况）。这种多样化的表达有利于进行谱系追踪和小肠干细胞分离，但对于更多的定量研究如 Lgr5-Cre 驱动的基因敲除策略可能存在局限性。 Cre-ERT2 融合蛋白由 Cre 重组酶和三重突变形式的人雌激素受体组成，在生理浓度下，其不与其天然配体（17β-雌二醇）结合，但会与合成的雌激素受体配体 4-羟基他莫昔芬（OHT 或他莫昔芬）和ICI 182780 （敏感性较低）结合。Cre-ERT2 限于细胞质，只能在暴露于他莫昔芬后进入细胞核内。为对抗他莫昔芬注射引起的雌激素激动剂混合效应（可导致妊娠小鼠晚期流产），可同时给予HTT。因此，当 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 小鼠与携带 loxP 侧翼序列的小鼠杂交时，他莫昔芬诱导的 Cre 介导的重组导致后代中表达 Lgr5 的细胞中 loxP 位点间的基因序列的敲除。 品系建立： EGFP-IRES-creERT2 载体设计时，将增强绿色荧光蛋白序列 (EGFP)、内部核糖体进入位点 (IRES)、CreERT2 融合基因（Cre-ERT2；融合至人雌激素受体配体结合域三重突变 G400V/M543A/L544A 的 Cre 重组酶）、polyA 信号和 loxP 侧翼的 neo 盒插入靶基因的第一个 ATG 密码子。通过电穿孔将此载体插入源自雄性 129P2/OlaHsd 的 IB10/E14IB10 胚胎干 (ES) 细胞中的靶基因内。将正确靶向的 ES 细胞注射到受体囊胚中，并将嵌合雄鼠与 C57BL/6 雌鼠杂交。然后将突变小鼠与 EIIa-cre 小鼠（C57BL/6 遗传背景，见品系货号 003724 https://www.jax.org/strain/003724）杂交，以去除 neo 选择盒。捐赠者报告，将获得的 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 小鼠（去除 floxed-neo）回交至 C57BL/6J（见下文的 SNP 说明）至少 4 代。接下来，将 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 小鼠与 Rosa26-lacZ 小鼠（C57BL/6 遗传背景，见品系货号 003474 https://www.jax.org/strain/003474）杂交。将具有两种突变的小鼠进一步回交超过 6 代。在到达杰克森实验室后，将小鼠与 C57BL/6J 近交小鼠（品系货号 000664 https://www.jax.org/strain/000664）杂交至少一代以建立种群。将小鼠选择性杂交以去除 Rosa26-lacZ 等位基因。 JAX小鼠资源库拥有近800种Cre小鼠品系，其中部分Cre表达鉴定结果可参考以下链接： https://www.jax.org/research-and-faculty/resources/cre-repository/characterized-cre-lines-jax-cre-resource |
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文献和实验naj2007 请教一下各位老师，在构建过表达载体的时候，VEGF和GFP是不是不可以做成融合蛋白，但是如果用不同的启动子的话，很容易丢失荧光，有没有什么解决方法。 zhujoker 可以做成融合蛋白的，即使是使用不同的启动子的话荧光也不那么容易丢失的，大不了你将荧光的启动子换成强的如CMV，EF1a之类。 kinguangjun 或者你可以用CMV-VEGF-IRES-GFP来做
D 编码区放置一个 LoxP-stop-LoxP 盒子，通过去除终止元件来进行调节，控制肿瘤发生的时间、位置和多样性，这种模型也被广泛用于肿瘤研究特别是肿瘤激活和发展过程。 集萃药康深耕基因编辑领域，利用基因编辑技术对 KRAS G12C 和 KRAS G12D 进行改造，并通过与组织特异性 cre 工具鼠配繁，使其自发形成肺癌。 图 2. KRAS 突变小鼠病理分析 结果显示：KRAS 通过与组织特异性 cre 工具鼠配繁可特异性表达 KRAS 突变，并发生肿瘤，可用于研究组织特异性的癌
类型的神经元也会展现出各种细微的突起特征，以适应多样的神经回路。不同类型的神经元在大脑中形成了复杂的回路。因此，了解详细的神经元形态对于理解正常的神经功能和病理机制至关重要。本文开发了一种策略，在整个大脑中稀疏标记相同类型的神经元，并在自闭症动物模型⸺Shank3 基因敲除（KO）小鼠中测试了其应用。 使用病毒 AAVPHP.eB-hSyn-DIO-EGFP-P2A-EGFPf 注射方式 眼眶后注射 注射计量 病毒滴度1.3E+12 vg/mL，注射体积 100μL 实验
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