Cas9 基因敲入工具鼠

系统命名：B6J.129(Cg)-Gt(ROSA)26Sor^{tm1.1(CAG-cas9*,-EGFP)Fezh}/J

普通命名：Rosa26-Cas9 knockin on B6J

品系货号：026179 

品系来源：
该品系由 Massachusetts Institute of Technology的张锋博士捐赠。
原始参考文献为Platt RJ; Chen S; Zhou Y; Yim MJ; Swiech L; Kempton HR; Dahlman JE; Parnas O; Eisenhaure TM; Jovanovic M; Graham DB; Jhunjhunwala S; Heidenreich M; Xavier RJ; Langer R; Anderson DG; Hacohen N; Regev A; Feng G; Sharp PA; Zhang F. 2014. CRISPR-Cas9 Knockin Mice for Genome Editing and Cancer Modeling. Cell 159(2):440-55 PubMed: 25263330 MGI: J:213550

品系描述：
Rosa26-Cas9 基因敲入小鼠具有 CAG 启动子驱动广泛表达 cas9 和 EGFP。EGFP 荧光广泛存在于脑、肾、肝、脾和心脏组织中，可在全脑中检测到 Cas9 蛋白。对多个器官（包括脑、肾、肝、脾、心脏组织）的分析表明，组成型 cas9 表达不会导致任何可检测到的毒性、形态学异常、肿瘤形成或 DNA 损伤或凋亡标志物的上调。通过病毒传递 cas9 的基因编辑受载体容量限制，而 Rosa26-Cas9 小鼠只需要特定的 gRNA 来同时产生单个或多个突变。混合遗传背景和 C57BL/6J 同源背景下，Rosa26-Cas9 基因敲入纯合小鼠可存活且可繁育。有些小鼠具有白色腹部斑点。

品系建立
使用 Rosa26-LSL-Cas9 靶向载体制备 Rosa26-Cas9 基因敲入。该载体设计有（从 5' 到 3'）一个 5' 同源臂、一个广泛表达的 CAG 启动子、loxP 侧翼的 3xSV40 polyA 终止盒、一个 3X-FLAG 表位标签、一个哺乳动物密码子优化的 cas9 基因（源自酿脓链球菌 Cas 9 [SpCas9]），侧翼有 2 个核定位信号、一个 P2A 核糖体跳跃剪切肽序列、一个增强型绿色荧光蛋白 (EGFP) 基因、一个土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件、牛生长激素 polyA、pPGK-Neo-pA 阳性选择盒和一个 3' 同源臂。该载体电转化入源自 129 的 R1 胚胎干 (ES) 细胞。将正确靶标的 ES 细胞注射到 C57BL/6N 囊胚中。将获得的嵌合小鼠通过与 C57BL/6N 小鼠杂交进行生殖系遗传检测。然后将小鼠与 FVB 背景的 β 肌动蛋白驱动的 Cre 重组酶品系（品系货号 003376 杂交，以切除 floxed STOP 盒。在到达杰克森实验室后，将小鼠与 C57BL/6J 小鼠（品系货号）杂交至少一代以建立种群。然后使用 (SNP) 标记物辅助方案将小鼠回交至 C57BL/6J 小鼠（品系货号 000664 ）。