LDH NAD+ (100X)

琼脂糖凝胶电泳法分离LDH同工酶及血清LDH总活力的测定

临床诊断的依据，也被利用于生物分类及遗传育种等工作中。本实验是用琼脂糖凝胶电泳法分离人血清乳酸脱氢酶五个同工酶（LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5）。血清乳酸脱氢酶的辅酶是NAD 。当它催化乳酸脱氢时，NAD 即被还原成NADH·H 。如果还有氧化型吩嗪二甲酯硫酸盐（N-methyl-phen-azo-nium-metho sulfate，简称PMS）和硝基蓝四唑（氮蓝四唑nitroblue tetrazolium，简称NBT）存在，则发生如下反应：当LDH同工酶区带在琼脂

乳酸脱氢酶（LDH）释放法

苯酯-3-p-氯化硝基苯四唑，20μl反应液（含0.03％ BSA，2.7U/ml硫辛酰胺脱氢酶，4.5mmol/L氢化型辅酶I（NAD＋），1.2％蔗糖的PBS），室温中放置20分钟。 6．在酶联检测仪上测定各孔的光密度（OD值），检测波长492nm，参考波长650nm。 2）特异性杀伤活性的计算 杀伤活性（％）＝[（OD实验组－OD总自然释放）/（OD最大释放组－OD总自然释放）]×100％

NK细胞活性测定：LDH法

一、原理活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下，LDH不能透过细胞膜，当细胞受到NK细胞的杀伤后，LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢，进而使NAD还原成NADH，后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化四氮唑（INT），INT 接受H＋被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶标仪上用490nm比色测定。二、仪器和材料酶标仪、YAC-1细胞、Hank's液（pH7.2～7.4）、RPMI1640完全培养液、乳酸锂或乳酸钠、硝基氯化四氮唑（INT）、吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）、NAD