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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
500
- 英文名:
EZ-press One Step qRT-PCR Kit
- 供应商:
EZBioscience
- 保存条件:
-20℃避光保存
- 规格:
500 Rxns×20μl/100 Rxns×20μl
| 规格: | 500 Rxns×20μl | 产品价格: | ¥6000.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100 Rxns×20μl | 产品价格: | ¥1400.0 |
二、产品组分
| Components | EZB-qRT-S (100 Rxns×20μl) |
EZB-qRT (500 Rxns×20μl) |
| 20×One Step qRT Enzyme Mix | 100 µl | 500 µl |
| 20×One Step qRT Buffer | 1 ml | 5 ml |
| 50× ROX Reference Dye 1 | 44 µl | 220 µl |
| 50× ROX Reference Dye 2 | 44 µl | 220 µl |
三、保存条件
本试剂盒建议置于-20°C避光保存。
四、产品特点
- 灵敏度高:以RNA为模板进行荧光染料法定量PCR检测的试剂盒。检测灵敏度可达到0.1 pg总RNA或小于10拷贝的靶基因;
- 、操作简单:本试剂盒中含有两管ROX参比染料,适用于任何仪器类型;使用时,只需根据仪器类型选用合适的ROX,再在配制的反应体系中加入模板RNA及引物,最后加水至指定体积即可,十分便于使用。
1、20× One Step qRT Enzyme Mix试剂含有高浓度的甘油,使用前请充分混匀后再短暂离心至管底;
2、反应液的配制请使用 RNase-free或者灭过菌的枪头、EP管等,尽量避免污染;
3、使用前,将 20× One Step qRT Enzyme Mix、2× One Step qRT Buffer和 ROX试剂从-20°C冰箱中取出,冰上放置 5 ~ 10分钟或用手紧握试剂管使之充分融化,上下颠倒 5 ~ 10次充分混匀(非常重要),然后使用离心机短暂离心至管底,放在冰上备用。
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文献和实验了我的扩增曲线呢? 其实,这种现象并不是偶发的,有很多原因可能导致,并且有个专属名称「Hook Effect」,翻译过来叫「鱼钩效应」。「鱼钩效应」指在荧光定量 PCR 过程中,DNA 扩增到指数增长期后出现的一种荧光信号不能保持稳定(或者上升)而出现下降的现象 [1]。 导致扩增曲线出现这一现象的因素比较复杂,这里我们分别从嵌入性染料法与探针法两种定量方式的角度为大家解释: 嵌入性染料法: 嵌入性染料法(例如 SYBR Green I)产生「鱼钩效应」主要是由于模板序列混杂,在 PCR
%,避免引物内含有互补序列,3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段,真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时,首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX(High 还是 Low)!试剂买回来,样也加好了,最后发现不能用在自家仪器上,内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择,如果不想这么麻烦,ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix (Q711)那是极好
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书,检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是,需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料,用以校正仪器系统以外的物理误差,比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的,当用此类试剂的时候,应该将 ROX 参比
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