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    首页 / 试剂 / 生物化学 / StarLighter SYBR Green qPCR Mix (Universal)
    StarLighter SYBR Green qPCR Mix (Universal)
    研选

    StarLighter SYB

    R Green qPCR Mix (Universal)
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    价格: ¥400
    品牌: 启衡星
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        北京普凯瑞生物科技有限公司

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      • 规格:

        100rxn×20μl (1ml)

                    StarLighter SYBR Green qPCR Mix   (Universal)
         
        货号 产品名称 规格 价格(元)
        FS-Q1001 StarLighter SYBR Green qPCR Mix (Universal) 100rxn×20μl (1ml) 400
        FS-Q1002 StarLighter SYBR Green qPCR Mix (Universal) 125rxn×20μl×4 (1.25ml×4) 1800

        产品简述:
        StarLighter SYBR Green qPCR Mix是一款含基因工程酶的qPCR试剂。该基因工程酶可耐受高浓度的SYBR Green I染料,反应体系中加入足够多的SYBR Green I 染料,能够降低荧光信号达到阈值的循环数(Ct值),提高信噪比、线性和灵敏度。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增特异性强,能有效减少非特异性扩增,数据结果更加可靠。产品能有效扩增复杂模板,能有效应对高GC或高AT的目的片段。同时抗抑制剂干扰能力强。

        主要应用:
        基因表达分析;
        低拷贝数基因检测;
        基因敲除验证;
        基因表达验证;
        RNA拷贝数检测(病毒及病菌等检测)。

        技术特点:
        扩增特异性强,数据结果可靠;
        反应效率高,Ct值提前;
        信噪比高,灵敏度高;
        GC或高AT的片段扩增效果好;
        耐受抑制剂能力强。

        优异表现:
        1. 扩增特异性强,数据结果可靠



        Fig1
        1. 以人的cDNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段, GC%=75.5%(高GC),分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;
        2. qPCR反应后产物的电泳图。
        注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,使用此试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。



        Fig2
        1. 以人的cDNA为模板,使用引物TR及不同厂家试剂,扩增长度为219bp的片段, GC%=64%,分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;
        2. qPCR反应后产物的电泳图。
        注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。



        Fig3
        1. 以人的cDNA为模板,使用引物UBC及不同厂家试剂,扩增长度为123bp的片段, GC%=52.0%(GC 均衡),分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;
        2. qPCR反应后产物的电泳图。
        注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。
        总结Fig1Fig2Fig3如下图(SLStarLighter SYBR Green qPCR Mix):
        Primer

        竞品
        ApoE(人,DNAamplicon length=322bp, GC%=75% TR(人,DNAamplicon
         length=219bp, GC%=64.0%
        UBC(人,cDNAamplicon length=123bp, GC%=52.0%
        特异产物 扩增效率 特异产物 扩增效率 特异产物 扩增效率
        TG 149.631% 96.795%    
        TK         102.101%
        VZ     97.196%    
        AB         98.789%
        TY3     98.028% 110.361%
        KA     108.63%    
        SL 105.049% 95.998% 100.374%
        YS         99.905%
        CW            
        BR         95.611%
        RC     92.762% 97.752%
        TY1         96.83%
         
        1. 扩增效率高,梯度稀释线性范围好,低拷贝检测灵敏度高

        Fig4
        KAPA Ion Torrent Library Quantification Kit 中浓度为8.3pM 的标准品作为S1,依次5倍稀释得到(S2-S10)为模板,StarLighter SYBR Green qPCR Mix与竞品KP的扩增及熔解曲线图。
        StarLighter SYBR Green qPCR Mix,从S1-S10,扩增效率(Eff=100.483%)好,扩增曲线完美,荧光信号强,熔解曲线单一峰,无非特异性扩增。
         
        1. 荧光信号强,灵敏度高  

        Fig5:
        使用市面上个品牌的qPCR试剂得到扩增曲线图,上图为去掉ROX后,各品牌的荧光信号值比较,竞品KPStarLighter SYBR Green qPCR Mix
        的荧光信号强度相对较高。

         
        1. Ct值提早出现         

        Fig6
        以人DNA为模板,使用引物TR及不同厂家试剂,扩增长度为219bp的片段,GC%=64%;在产物经电泳验证为目的片段的前提下,扩增曲线去Rox校正后,StarLighter SYBR Green qPCR Mix CT值最小(灵敏度高)。
             
               5.高GC或高AT的片段扩增效果好


        Fig7
        以人的DNA为模板,使用引物F8-exon10及不同厂家试剂,扩增长度为399bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=94.365数据结果较好,竞品TY3Eff=121.91%,竞品KPEff=NA(在较高浓度时无扩增)。

        Fig8
        以人的DNA为模板,使用引物hPRT1及不同厂家试剂,扩增长度为198bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=100.868%结果较好,竞品TY3Eff=94.630%,竞品KPEff=98.334%

        Fig9
        以人的DNA为模板,使用引物β-actin及不同厂家试剂,扩增长度为290bp的片段,GC%=61.0%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=102.101%相对较好,竞品TY3Eff=110.787%,竞品KPEff= NA(在较高浓度时无扩增)。

        Fig10
        以人的DNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段,GC%=75.5%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=101.307%为相对较好,竞品TY3Eff=150.097%,竞品KPEff= NA(在较高浓度时无扩增)。

               6.耐受抑制剂能力强

        Fig11
        以人的DNA为模板,使用引物F8-exon10及不同厂家试剂,扩增长度为393bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=94.365%相对较好,竞品TY3Eff=121.91%,竞品KPEff= NA(在较高浓度时无扩增)。
        以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板,原始模板浓度为100ng/μl,使用10mM Tris(含0.05%吐温-20)稀释2倍后作为S1,之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2S3S4StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求,竞品TY3及竞品KPS1模板扩增均受到不同程度的抑制。

        Fig12
        以人的DNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段,GC%=75.5%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=101.307%相对较好,竞品TY3Eff=150.097%,竞品KPEff= NA(在较高浓度时无扩增)。
        以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板,原始模板浓度为100ng/μl,使用10mM Tris(含0.05%吐温-20)稀释2倍后作为S1,之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2S3S4StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求,竞品TY3及竞品KPS1模板扩增均受到不同程度的抑制。
        7)保存稳定性
        7.14℃保存稳定性

        Fig13
        以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,4℃储存最多达39天时,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。
        7.2、常温与37℃保存稳定性

        Fig14
        以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,常温或37℃储存最多达8天时,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。

        7.3、冻融稳定性

        Fig15
        以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,冻融次数最多达35次,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。

        7.17.27.3实验结果均出自ABI7500 Fast机器,使用Fast模式,程序为95℃5min40cycles95℃30sec60℃45sec),加熔解曲线。

        7.4、不同机型/程序稳定性
        1)使用ABI QuantStudio6 Flex

        Fig16
        如上图,使用引物ApoE,扩增长度为322bp的片段, GC%=75.5%;扩增体系与反应程序同7.17.27.3,默认升温1.9℃/s,降温1.6℃/s。从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=99%.
        2)使用ABI 7500 FAST STANDARD 模式

        Fig17:                                                        
        如上图,使用引物TR,扩增长度为219bp的片段, GC%=64%;        
        从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=103%.

        Fig18
        如上图,使用引物hPRT1,扩增长度为198bp的片段 GC%=37%
        从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=95%

        定量反应(体系、程序参数)
        1)推荐反应体系
        组分  10 µl /rxn  20 µl /rxn 终浓度
        H2OPCR级) 补至10µl 补至20µl  N/A
        2× SYBR qPCR Ready Mix 5μl 10μl 1x
        10 µM 正向引物    0.3 μl  0.6 μl 300 nM  
        10 µM 反向引物    0.3 μl  0.6 μl 300 nM  
        cDNA模板 <50ng/μl <50ng/μl 根据需要
        RoX 0.2μl 0.4μl 50/500nM(根据仪器需要)

        2)推荐反应程序
        步骤 温度 时间 循环
        酶激活 95℃ 5 min  
        变性 95℃ 30 sec 40 cycles
        退火/延伸 数据采集 60℃ ≥20 sec(根据仪器和扩增产物长度;若采用三步法,20sec退火后,72℃延伸1sec
        熔解曲线 根据仪器要求

        相关文献:
        [1] Liu S , Sun Y , Yang R , et al. Expression profiling of TRIM gene family reveals potential diagnostic biomarkers for rifampicin-resistant tuberculosis[J]. Microbial Pathogenesis, 2021, 157:104916-.
        [2] Shi L , Wen Z , Li H , et al. Identification of Hub Genes Associated With Tuberculous Pleurisy by Integrated Bioinformatics Analysis[J]. Frontiers in Genetics, 2021, 12:2267-.
      温馨提示:不可用于临床治疗。

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