StarLighter 染料法 qPCR 预混液（通用型）

产品简述：
StarLighter SYBR Green qPCR Mix是一款含基因工程酶的qPCR试剂。该基因工程酶可耐受高浓度的SYBR Green I染料，反应体系中加入足够多的SYBR Green I 染料，能够降低荧光信号达到阈值的循环数（Ct值），提高信噪比、线性和灵敏度。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增特异性强，能有效减少非特异性扩增，数据结果更加可靠。产品能有效扩增复杂模板，能有效应对高GC或高AT的目的片段。同时抗抑制剂干扰能力强。

主要应用：
基因表达分析；
低拷贝数基因检测；
基因敲除验证；
基因表达验证；
RNA拷贝数检测（病毒及病菌等检测）。

技术特点：
扩增特异性强，数据结果可靠；
反应效率高，Ct值提前；
信噪比高，灵敏度高；
高GC或高AT的片段扩增效果好；
耐受抑制剂能力强。

优异表现：

1. 扩增特异性强，数据结果可靠

Fig1：

1. 以人的cDNA为模板，使用引物ApoE及不同厂家试剂，扩增长度为322bp的片段， GC%=75.5%（高GC），分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图；
2. 为qPCR反应后产物的电泳图。

注：SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix，使用此试剂得到非常完美的扩增曲线，荧光信号强，熔解曲线及电泳条带单一、准确。



Fig2：

1. 以人的cDNA为模板，使用引物TR及不同厂家试剂，扩增长度为219bp的片段， GC%=64%，分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图；
2. 为qPCR反应后产物的电泳图。

注：SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix，其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线，荧光信号强，熔解曲线及电泳条带单一、准确。



Fig3：

1. 以人的cDNA为模板，使用引物UBC及不同厂家试剂，扩增长度为123bp的片段， GC%=52.0%(GC 均衡)，分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图；
2. 为qPCR反应后产物的电泳图。

注：SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix，其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线，荧光信号强，熔解曲线及电泳条带单一、准确。
总结Fig1、Fig2、Fig3如下图（SL为StarLighter SYBR Green qPCR Mix）：

1. 扩增效率高，梯度稀释线性范围好，低拷贝检测灵敏度高

Fig4：
以KAPA Ion Torrent Library Quantification Kit 中浓度为8.3pM 的标准品作为S1，依次5倍稀释得到（S2-S10）为模板，StarLighter SYBR Green qPCR Mix与竞品KP的扩增及熔解曲线图。
StarLighter SYBR Green qPCR Mix，从S1-S10，扩增效率（Eff=100.483%）好，扩增曲线完美，荧光信号强，熔解曲线单一峰，无非特异性扩增。
 

1. 荧光信号强，灵敏度高  

Fig5:
使用市面上个品牌的qPCR试剂得到扩增曲线图，上图为去掉ROX后，各品牌的荧光信号值比较，竞品KP与StarLighter SYBR Green qPCR Mix的荧光信号强度相对较高。
 

1. Ct值提早出现         

Fig6：
以人DNA为模板，使用引物TR及不同厂家试剂，扩增长度为219bp的片段，GC%=64%；在产物经电泳验证为目的片段的前提下，扩增曲线去Rox校正后，StarLighter SYBR Green qPCR Mix CT值最小（灵敏度高）。
     
       5.高GC或高AT的片段扩增效果好

Fig7：
以人的DNA为模板，使用引物F8-exon10及不同厂家试剂，扩增长度为399bp的片段，GC%=35.6%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=94.365数据结果较好，竞品TY3，Eff=121.91%，竞品KP，Eff=NA（在较高浓度时无扩增）。

Fig8：
以人的DNA为模板，使用引物hPRT1及不同厂家试剂，扩增长度为198bp的片段，GC%=35.6%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=100.868%结果较好，竞品TY3，Eff=94.630%，竞品KP，Eff=98.334%。

Fig9：
以人的DNA为模板，使用引物β-actin及不同厂家试剂，扩增长度为290bp的片段，GC%=61.0%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=102.101%相对较好，竞品TY3，Eff=110.787%，竞品KP，Eff= NA（在较高浓度时无扩增）。

Fig10：
以人的DNA为模板，使用引物ApoE及不同厂家试剂，扩增长度为322bp的片段，GC%=75.5%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=101.307%为相对较好，竞品TY3，Eff=150.097%，竞品KP，Eff= NA（在较高浓度时无扩增）。

       6.耐受抑制剂能力强

Fig11：
以人的DNA为模板，使用引物F8-exon10及不同厂家试剂，扩增长度为393bp的片段，GC%=35.6%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=94.365%相对较好，竞品TY3，Eff=121.91%，竞品KP，Eff= NA（在较高浓度时无扩增）。
以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板，原始模板浓度为100ng/μl，使用10mM Tris（含0.05%吐温-20）稀释2倍后作为S1，之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2、S3、S4。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求，竞品TY3及竞品KP的S1模板扩增均受到不同程度的抑制。

Fig12：
以人的DNA为模板，使用引物ApoE及不同厂家试剂，扩增长度为322bp的片段，GC%=75.5%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=101.307%相对较好，竞品TY3，Eff=150.097%，竞品KP，Eff= NA（在较高浓度时无扩增）。
以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板，原始模板浓度为100ng/μl，使用10mM Tris（含0.05%吐温-20）稀释2倍后作为S1，之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2、S3、S4。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求，竞品TY3及竞品KP的S1模板扩增均受到不同程度的抑制。
（7）保存稳定性
7.1、4℃保存稳定性

Fig13：
以人的DNA为模板，使用引物UBC，扩增长度为123bp的片段，GC%=52%；从扩增曲线上可以看出，4℃储存最多达39天时，未见明显信号强度降低和Ct值延迟。
7.2、常温与37℃保存稳定性

Fig14：
以人的DNA为模板，使用引物UBC，扩增长度为123bp的片段，GC%=52%；从扩增曲线上可以看出，常温或37℃储存最多达8天时，未见明显信号强度降低和Ct值延迟。

7.3、冻融稳定性

Fig15：
以人的DNA为模板，使用引物UBC，扩增长度为123bp的片段，GC%=52%；从扩增曲线上可以看出，冻融次数最多达35次，未见明显信号强度降低和Ct值延迟。

7.1、7.2、7.3实验结果均出自ABI7500 Fast机器，使用Fast模式，程序为95℃、5min，40cycles（95℃、30sec，60℃、45sec），加熔解曲线。

7.4、不同机型/程序稳定性
（1）使用ABI QuantStudio6 Flex

Fig16：
如上图，使用引物ApoE，扩增长度为322bp的片段， GC%=75.5%；扩增体系与反应程序同7.1、7.2、7.3，默认升温1.9℃/s，降温1.6℃/s。从扩增及熔解曲线上可以看出，扩增产物特异性很好，Eff=99%.
（2）使用ABI 7500 FAST STANDARD 模式

Fig17：                                                        
如上图，使用引物TR，扩增长度为219bp的片段， GC%=64%；        
从扩增及熔解曲线上可以看出，扩增产物特异性很好，Eff=103%.

Fig18：
如上图，使用引物hPRT1，扩增长度为198bp的片段， GC%=37%；
从扩增及熔解曲线上可以看出，扩增产物特异性很好，Eff=95%

定量反应（体系、程序参数）
（1）推荐反应体系

（2）推荐反应程序

相关文献：
[1] Liu S , Sun Y , Yang R , et al. Expression profiling of TRIM gene family reveals potential diagnostic biomarkers for rifampicin-resistant tuberculosis[J]. Microbial Pathogenesis, 2021, 157:104916-.
[2] Shi L , Wen Z , Li H , et al. Identification of Hub Genes Associated With Tuberculous Pleurisy by Integrated Bioinformatics Analysis[J]. Frontiers in Genetics, 2021, 12:2267-.