- ￥7000
- EZBioscience
- EZB-RT2G-L
- 美国
- 2026年03月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
500
- 英文名：
4× EZscript RT Mix II
- 供应商：
EZBioscience
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
500 Rxns×20μl
本试剂盒为包含去除基因组DNA的高效DNase的新一代快速逆转录试剂盒，与上一代产品相比具有更高的逆转录效率。试剂盒中主要包含4管成分：gDNA Remover中主要包括浓缩的DNase及Buffer；4× EZscript RT Mix II中主要包含了逆转录所需的除引物以外的所有成分（逆转录酶、buffer、RNase Inhibitor、dNTPs等），Oligo dT18、Random Hexamer为独立包装，便于添加目标片段特异性引物（如microRNA, lncRNA, circRNA等的特异性引物）。
本试剂盒采用的DNase及Buffer反应系统经过特殊的优化，仅需室温（25°C）反应5分钟，就能降解95%以上的基因组DNA，极大的降低了可能残留的基因组对结果的干扰。
本试剂盒采用的新型M-MLV突变体逆转录酶具有很强的抗干扰能力及扩增能力，扩增效率尤佳，同时采用了新优化的反应体系，进一步提高了逆转录效率。使用本试剂盒逆转录15分钟得到的扩增产物量可以达到AMV逆转录酶大约1h的产物量（Ct值相同）。后续逆转录产物建议用于PCR、qPCR、基因克隆等实验。
二．产品组分
| Component | EZB-RT2G-L (500 Rxns) |
| 4× EZscript RT Mix II | 550 μl × 5 tubes |
| Oligo dT18 | 110 μl × 5 tubes |
| Random Hexamer | 110 μl × 5 tubes |
| gDNA Remover | 220 μl × 5 tubes |
| Nuclease free ddH2O | 1 ml × 5 tubes |
三．保存条件
本试剂盒建议置于-20℃保存。
四．试剂盒特点
1、本试剂盒为预先混好的4× EZscript RT Mix II，只需加入模板RNA和水混匀后便可以开始反应；使用了新一代逆转录酶，具有更强的酶活性和更高的灵敏度。
2、含有去除基因组DNA的gDNA Remover，只需室温5分钟即可去除基因组DNA。
3、只需42℃、15分钟即可高效合成荧光定量PCR所需的高质量cDNA模板，是进行荧光定量PCR反应的理想试剂。
4、含有Oligo(dT)18和Random Hexamer两种反转录引物，可根据实际情况区别使用。反转录反应可使用Oligo(dT)18引物或者Random Hexamer引物，也可以Oligo(dT)18和Random Hexamer两种引物同时使用。只扩增一种目的基因时，也可以使用Specific Primer作为反转录引物。
五．注意事项
1、当同时需要进行数次反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2、4× RT Master Mix在使用前需Vortex振荡混匀，轻轻离心后使用。由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。同时，要使用精确、量程适合的移液枪，并且不要使Tip插入液面过深，否则会因Tip壁粘着造成损失，而使酶量不足。
3、分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。
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文献和实验设计策略 PS：该方法适用于检测或部分 DNA 片段克隆，不适合全长基因克隆 反转录 PCR 的主要问题是基因组 DNA (gDNA) 污染的存在，这将导致产生假阳性信号，特异性降低或对特定 RNA 的过高估计。为了消除 RT-PCR 中 gDNA 的干扰，可将引物设计为与两个外显子的接合部退火，该点为 cDNA 序列专有，因此 gDNA 将不能被扩增。 cDNA 特异的引物可通过三个途径设计（如下图所示）。 cDNA、gDNA选择性引物
基因亦可用于对取样量进行均一化。 如果进行的是单管多重实验，还需考虑内参基因的表达量。当内参基因表达量远高于目的基因时，内参基因将优势扩增，体系中的原料消耗速度过快，造成目的基因扩增效率降低。此时可以选择引物浓度降低的 TaqMan 试剂盒（Primer-Limited）对内参基因进行测定。 表 2：常用人类内参基因试剂盒（cDNA） 如何避免污染发生？出现污染怎么办？ 样本间的交叉污染 为了避免样本之间的交叉污染，规范化的取样和样本保存非常重要。不同样本移液时谨记更换枪头，并尽量使用带
（红色星号=突变核苷酸，灰色线条 = 删除的序列，蓝色线条 = 插入的序列）。也可考虑使用其他引物设计，如具有 5′ 重叠序列的引物[4-6]。 图 6.使用含突变序列和同源末端序列的 PCR 引物进行的定点突变。该图所示方法阐述了 Invitrogen™ GeneArt™ 定点突变试剂盒的机制，其中，方块代表重组和突变位点。 5.甲基化 PCR 可用于研究位点特异性甲基化。在 甲基化特异性 PCR（MSP）方法中，设计了两个引物对，以区分目标位点的甲基化状态[7,8]。 首先使用重亚硫酸盐处理
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