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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
27
- 英文名:
详见说明书
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
4°C保存
- 规格:
100T/盒
a-GlucosidaseⅡ mRNA原位杂交试剂盒100T/盒由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
| 产品名称 | a-GlucosidaseⅡ mRNA原位杂交试剂盒100T/盒 |
| 规格 | 100T/盒 |
| 货号 | XG-Y6331 |
产品名称 a-GlucosidaseⅡ mRNA原位杂交试剂盒100T/盒
规格 100T/盒
特异性 人、大鼠、小鼠、兔
标记方式 3’—尾段标记
保存条件 4°C保存一年
试剂盒内容 1.a-GlucosidaseⅡ 寡核苷酸探针杂交液 2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.胃蛋白酶(×10;Pepsin) 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
准备工作:
产品仅供科研固定液:4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g,柠檬酸三钠(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
特点:
1. 安全、快速、重复性好;
2. 特异性100%,灵敏度超过90%;
3. 探针性能稳定,低温保存一年以上;
4. 荧光信号强,结果判定直观可靠;
5. 操作简单,定位精准,无实验污染。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
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(2R,3S)-3-苯甲酰氨基-2-羟基-3-苯基 英文名称 Methyl (2R,3S)-3-(benzoylamino)-2-hydroxy-3-phenylpropanoate 分 子 量: 299.32 CAS NO.: 32981-85-4 纯 度: ≥98% 分子式: C17H17NO4 性状: 纯白色结晶粉末 规格: 20mg/50mg/1g,可按客户需求包装! 用途: 用于科研研究、鉴定、药理实验等
川续断皂苷乙 英文名称 Dipsacoside B 分 子 量: 1075.24 CAS NO.: 33289-85-9 纯 度: ≥98% 分子式: C53H86O22 性状: 白色结晶粉末 规格: 20mg/50mg/1g,可按客户需求包装! 用途: 用于科研研究、鉴定、药理实验等
柴胡皂苷D 英文名称 Saikosaponin D 分 子 量: 780.98 CAS NO.: 20874-52-6 纯 度: ≥98% 分子式: C42H68O13 性状: 白色结晶粉末 规格: 20mg/50mg/1g,可按客户需求包装! 用途: 用于科研研究、鉴定、药理实验等
组织KSHV(KAPOSISARCOMA-ASSOCIATEDHERPESVIRUS)病毒定量PCR扩增检测试剂盒20次 1-Benzyl L-aspartate 7362-93-8 中文名:L-天冬氨酸1-苄酯 分子式:C11H13NO4 度:98.0%
组织JNK3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次 1-Benzyl-1H-indazol-3-ol 中文名:1-苄基-1H-吲唑-3-醇 分子式:C14H12N2O 度:98.0%
组织JNK2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次 1-Benzylimidazole 4238-71-5 中文名:1-苄基咪唑 分子式:C10H10N2 度:98.0%
组织JNK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次 1-Chloro-6-(5-(prop-1-ynyl)thiophen-2-yl)hexa-3,5-diyn-2-ol 中文名: 分子式:C13H9ClOS 度:97.0%
组织JAK3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次 1-Chloroethyl cyclohexyl carbonate 99464-83-2 中文名: 分子式:C9H15ClO3 度:98.0% 关键词:
兔子球蛋白G(IgG)ELISAKit ELISA. 96T/48T 8-Phenyloctanoic acid 中文名:8-苯基辛酸 分子式:C14H20O2
兔子球蛋白G(IgG)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 1,2-O-Isopropylidene-β-D-fructopyranose 中文名: 分子式:C9H16O6 度:98.5%
兔子球蛋白Eelisa试剂盒 兔子球蛋白E试剂盒 规格型号:96T/48T 兔子球蛋白E试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:兔子球蛋白E试剂盒、兔子球蛋白E elisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 8-Hydroxyodoroside A 176519-75-8 中文名: 分子式:C30H46O8
兔子球蛋白Eelisa试剂盒 兔子球蛋白E试剂盒 规格型号:96T/48T 兔子球蛋白E试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:兔子球蛋白E试剂盒、兔子球蛋白E elisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 8-Hydroxyhyperforin 8,1-hemiacetal 5
兔子球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 8-Hydroxyodoroside A 中文名: 分子式:C30H46O8 度:96.0%
a-GlucosidaseⅡ mRNA原位杂交试剂盒100T/盒Medetomidine 中文名:盐酸美托咪啶 分子式:C13H17ClN2 度:98.0% 胃蛋白酶 1:3000 25g
Methyl 2,2-dithienylglycolate 中文名: 分子式:C11H10O3S2 度:98.0% Pepsin1:3000,PorcineSource 100g
Tiotropium bromide 中文名:噻托溴铵 分子式:C19H22NO4S2 度:98.0% 胃蛋白酶抑制剂 5mg
4-(4-(5-(Aminomethyl)-2-oxooxazolidin-3-yl)phenyl)morpholin-3-one 中文名: 分子式:C14H18ClN3O4 度:98.0% Pepstatin 25mg
Lenalidomide 中文名:来那度胺 分子式:C13H13N3O3 度:98.0% 尾加压素 II(Human Urotensin II) 作用: ELISA 规格: 48T/96T 进口分装
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