钙离子荧光探针Cal-590 钠盐
货号 |
20515 |
存储条件 |
f/l |
规格 |
5x50 ug |
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Ex (nm) |
573 |
Em (nm) |
587 |
分子量 |
1026.38 |
溶剂 |
Water |
产品详细介绍 |
简要概述
钙离子荧光探针Cal-590 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630提供最强大的均匀荧光测定工具,用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂(如Fluo-3 AM,Fluo-4 AM和Rhod-2 AM)相比,这些钙敏感染料明显更亮,并提供更高的信噪比,大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内,Cal520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割,产生带负电荷的荧光Calbryte 染料,留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时,该受体表示细胞内钙的释放,这显着增加了Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM, Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的最强大指标。
除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中,不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外,Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为完美的钙指示剂,可与绿色荧光蛋白(GFP)细胞系进行多色检测。 此外,Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化,可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发,并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化,可在555 nm激发,并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化,可在594 nm激发,并与TexasRed®滤光片组配合使用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的钙离子荧光探针。
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产品说明书
使用Cal-520 AM,Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类
1.使用Cal-520 ,Cal-590 或Cal-630 AM酯:
AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下,AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。
a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。
b)在实验当天,将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(0.04%Pluronic®F-127)中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。
注意:非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。
c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒(1-2 mM)加入染料工作溶液中(最终浓度为0.5-1 mM)以减少渗漏去酯化指标。
d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。
e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟,然后在室温下将板孵育另外30分钟。
注意:孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。
f)用HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如1mM丙磺舒,如果适用)替换染料工作溶液,以去除多余的探针。
g)在Ex / Em = 490 / 525nm(对于Cal-520 AM),540 / 5000nm(对于Cal-590 AM)或600 / 640nm(对于Cal-630 AM)进行实验。
2.测量细胞内钙响应:
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:
[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。
解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。