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- IMMOCELL
- 厦门
- IM-M028
- 2025年08月19日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Mouse Monocyte - macrophage Leukemia Cells
- 库存：
9999
- 供应商：
厦门逸漠生物科技有限公司
- 肿瘤类型：
详询
- 细胞类型：
贴壁/悬浮
- 品系：
小鼠细胞株
- 组织来源：
鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；单核细胞；巨噬细胞
- 相关疾病：
详询
- 物种来源：
详询
- 免疫类型：
详询
- 细胞形态：
不规则圆形
- 是否是肿瘤细胞：
否
- 器官来源：
详询
- 运输方式：
复苏发货或干冰发货（顺丰快递）
- 年限：
长期
- 生长状态：
正常
- 规格：
1*10^6
细胞描述
此细胞株源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。
细胞特性
1) 来源：鼠科白血病病毒诱导的肿瘤;单核细胞;巨噬细胞
2) 形态：不规则圆形，传代时密度要大，易分化
3) 含量：>1x106 个/mL
4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式
(1)干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;
(2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
(3)收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞接收后的处理：
1) 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2) 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，(10×，20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3) 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。
4) 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中(或新的培养瓶中)。
5) 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。
6)备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。
细胞培养步骤
一. 培养基及培养冻存条件准备：
1)准备:DMEM 培养基;优质胎牛血清 10%;添加Glutamax 1%;Sodium Pyruvate 1 %;P/S 1%
注意：DMEM基础培养基时要确认下培养基中谷氨酰胺、bing tong酸钠是否添加，如果没有添加，在培养细胞时技术人员要添加谷氨酰胺、bing tong酸钠。传代时密度要大，易分化。
2)培养条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二. 细胞处理：
1) 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注：第一次传代推荐传代比例为1:2。
该细胞也可以用细胞刮铲替代胰酶来对细胞进行处理。(注：传代时，吸走部分培养液，留下少许培养液(如T75培养瓶留下10ml)，用无菌细胞刮铲刮拭细胞附着培养表面将细胞刮落，收集细胞后离心去上清，重悬后接种到新的装有新鲜培养液的培养瓶内或对细胞进行冻存)。
3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为类;
1，细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2，4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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文献和实验细胞学堂丨养不好RAW 264.7，是因为忽略了这几点，RAW264.7分化有哪些问题要注意
和培养器皿的材料也有关，有时RAW264.7细胞会出现太容易吹下的情况，连分化细胞都贴壁较松，此时更适宜用巴氏管吹打； 4. 培养时，无法保证100% 不分化，通过传代可以将分化比例控制在一定范围 5. RAW264.7细胞分裂活跃，记得每天看一看，周末也要抽点时间关心一下它哦~ 小知识 RAW 264.7细胞系的起源 加利福尼亚索尔克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）诱发肿瘤的腹水中建立了RAW 264细胞
RAW264.7因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢，普通的方法根本就不可能将它消化下来，这也是养这种细胞最头痛的问题。现将我的一点心得，简介如下：消化液：0.5％胰酶、0.2％EDTA，实验前加温到37度以50ml培养瓶为例：1、细胞贴壁生长，长满瓶底80％时，弃去培养液，加D-HANKS 漂洗 两次；2、 加入含胰酶和EDTA的消化液1－2ml,消化37℃约2-5min，镜下可见细胞基本圆形回缩即中止消化，弃消化液加D-HANKS 漂洗两次；3、加入新培养液10ml复吹打混悬细胞
我养的是RAW264.7细胞株，前面有战友都提到过这种细胞的消化传代，但是因为这种细胞最大的特点是贴壁特别强， 每次传代都很难消化下来， 刚开始使用胰酶消化，发现37度， 消化15min细胞也还是吹不起来，后来又用单纯的用细胞刮刀刮的办法，但是这样养了一段时间，发现细胞损伤非常大，贴壁性变差，生长缓慢，后来使用了现在这个方法，到现在细胞的生长状况一直很好!简述如下：1) 将培养瓶内旧的培养液弃掉， 然后用D-Hanks液洗两次，(一定要洗干净，以免影响胰酶的消化作用)2) 加入0.25%胰酶
