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12个月
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西安百萤
Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 黄色荧光
| 货号 | 13507 | 存储条件 | f/l |
| 规格 | 200 Tests | ||
| Ex (nm) | 499 | Em (nm) | 521 |
| 分子量 | 溶剂 | ||
简要概述
半胱天冬酶在细胞凋亡和细胞信号传导中起重要作用。胱天蛋白酶-3（CPP32 / apopain）的激活对于细胞凋亡的起始是重要的。 Caspase 3也被确定为药物筛选目标。胱天蛋白酶3对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）具有底物选择性。该Amplite™Caspase-3检测试剂盒使用（Z-DEVD）2R110作为荧光指示剂来测定caspase-3活性。半胱天冬酶对R110肽的切割产生强荧光的R110，可在510-530 nm荧光检测，激发488 nm荧光仪器中最常用的激发光源。R110衍生的半胱天冬酶底物可能是用于荧光检测各种半胱天冬酶活性的最敏感指标。Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 黄色荧光可以用于荧光酶标仪或荧光计连续测量细胞提取物和纯化酶制剂中半胱天冬酶-3的活性。它还可以与流式细胞术一起用于分析细胞凋亡和半胱天冬酶3和7的活性。
产品说明书
操作方法
1.用10μL10X测试化合物（对于96孔板）或5μL5X测试化合物（对于384孔板）处理细胞到PBS或所需缓冲液中。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。
2.将细胞板在培养箱中孵育所需的一段时间以诱导细胞凋亡。
注意：我们用星形孢菌素（SS）在37℃处理Jurkat细胞4小时以诱导细胞凋亡，详细信息请参见图1。
3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 3/7工作溶液。
4.将板在室温下孵育至少1小时，避光。
5.在制动器关闭的情况下以800rpm离心细胞板2分钟。
6.用OD = 490nm的吸光度板读数器监测吸光度的增加。
百萤生物是AAT Bioquest中国区域官方授权代理
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文献和实验， 5~10min/次？→ECL显影或NBT/BCIP显色。结果：2、荧光分光光度计分析原理：活化的Caspase-3能够特异切割D1E2V3D4-X底物，水解D4-X肽键。根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC.在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的AMC才能被激发发射荧光。根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。 方法：收获细胞正常或凋亡细胞，PBS洗涤，制备细胞裂解液，加Ac
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色
， 5~10min/次?→ECL显影或NBT/BCIP显色。结果如图9-2： 2 荧光分光光度计分析 原理：活化的Caspase-3能够特异切割D1E2V3D4-X底物，水解D4-X肽键。根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC。在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的AMC才能被激发发射荧光。根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。方法：收获细胞正常
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