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上海觅拓生物科技有限公司
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文献和实验3.(上)光轴和视场周边区域的光强度是影响图像质量的一项因素。当我们观察到较大视场时,阴影会更加严重。(左下)以较大视场进行拼接意味着需要的图像采集时间较短,但是图像接缝可能会很明显。在可以接受较低图像质量的情况下,这一策略可以加快实验速度。(右下)如果需要无缝拼接图像,则需要使用较小的视场。 培养皿类型:尽管玻璃底的培养皿或多孔板对于图像质量而言最佳,但是聚苯乙烯多孔板不但可以节省成本还具有更好的细胞粘附性。以下为选择非玻璃底培养容器的技巧: 培养容器类型会影响图像质量和工作距离(WD)。使用较厚
稳定性,还要避免气流从空调直接吹向显微镜。 3.通过精确设置焦点和校正环提高图像质量 解决诸如 Z 漂移之类时间性波动的另一种方法是开始活细胞实验前尽可能精确设置焦点和环校正。 研究人员往往只会细心调整焦点,而忽略了校正环。然而,校正环能够显著改善图像的质量,在进行深层组织观察或使用高数值孔径物镜时尤其如此。 校正环的理想位置取决于诸如样品折射率、观察平面深度和盖玻片厚度等许多因素。即便大多数盖玻片和玻璃底培养皿的厚度只有 170 μm(#1.5),其仍然会导致波动,并且更重要的是,不能以塑料
通过物镜光瞳的相位膜。另一方面,被样品偏转的光线在相位膜外通过,从而在两个分量相互干扰的点产生明暗对比。这一过程的典型特征是,在样品的折射率分布发生变化的梯度处会出现光晕现象。厚样品不适合采用这种方法,因为会出现过强的光晕。 微分干涉方法(图 1b)是一种偏振剪切干涉仪,在聚光镜光瞳和物镜光瞳位置装有互补的沃拉斯顿棱镜。样品图像变为在固定方向上略微偏移的重像,并且样品的折射率梯度带有阴影,使其看起来具有三维立体感。由于采用了偏光干涉,如果有塑料皮氏培养皿或其它物体在光路中造成偏振失真,则无法进行观察
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