外泌体提取试剂盒（尿液）

★产品名称：外泌体提取试剂盒（尿液）

★产品用途：适用于尿液，可以提取 500ml 尿液

★目录价格：4000；产品货期：现货；

★产品货号：UR52126；产品规格：20 T；

★保存方式：常温18-25℃；运输条件：常温

产品描述：

外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。

外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。宇玫博生物自主开发的外泌体提取试剂盒，组分经过优化处理，适用于尿液中的外泌体提取，可快速高效地获得外泌体颗粒，可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

产品组成：

组分名称	UR52126	UR52129
Exosome Concentration Solution*	120 mL	12 mL
Exosome Solution Buffer*	10 mL	1 mL
50 mL离心过滤柱	20 个	2 个

* Nuclease-free, Sterile

质控数据：

牛奶                                    细胞上清                                  血清

操作视频：

除了血液、血液、尿液等外泌体提取纯化操作视频教学外，还提供了超滤浓缩、 MSC 培养、肿瘤/T 细胞培养操作视频！

 

操作规程：

一、 样品预处理

1、 取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置于冰上，如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；

2、 样品初始用量：单次提取时的尿液量建议不低于20 mL；

3、 离心去细胞碎片：将样品转移至离心管中，于4℃以3,000 ×g（~5,200 rpm**）离心10 min，去除样品中的细胞碎片（注：若沉淀较多，可3,000 ×g，10 min离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液）；

**为约10 cm有效离心半径的大离心机换算（≥15 mL离心管），下同。

4、 离心去杂质碎片：将离心上清液转移至新的离心管中，于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）离心10 min，去除样品中的杂质碎片；

5、 样本过滤：去除杂质碎片的离心上清液转移到50 mL离心过滤柱中，于4℃以3,000 ×g（~5,200 rpm**）离心10 min，取过滤柱下室液体（注：若上室中有残留液体，可重复本步骤以获得更多样本量）；

6、 上清液转移：去除杂质碎片的上清液转移到新离心管中。

二、 提取外泌体

1、 上清液预处理：在去除杂质的离心上清液中加入Exosome Concentration Solution（ECS试剂），具体的加入剂量为每20 mL尿液加4 mL ECS试剂；

2、 溶液混合：加入ECS试剂后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再放置于4℃静置８ h以上（注：增加静置时间可提高外泌体得率，但不可超过24 h）；

3、 沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）离心60 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒（注：尽可能吸尽上清液）；

4、 再次离心：将含有沉淀的离心管再次于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）离心2 min，弃上清（注：尽可能吸尽上清液）；

5、 外泌体重悬：取合适量的Exosome Solution Buffer（ESB试剂）均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中（建议每20 mL尿液用200 μL左右ESB试剂重悬）；

6、 收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12,000 ×g（~12,400 rpm*）离心2 min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒（注：若沉淀较多，可12,000 ×g，2min离心多次至无明显沉淀，每次取上清液）。

*为约7 cm有效离心半径的小离心机换算（≤2 mL离心管）。

7、 外泌体的保存：纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。

经典案例：