尿液外泌体抽提试剂盒Plus(外泌体提取)

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构，存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从尿液中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

 

组分信息

* Nuclease-free, Sterile

 

储存条件

 

室温运输，室温保存，有效期2年。

 

使用说明

 

1.样本预处理

1）取样：收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用；

2）样品初始用量：单次提取时的尿液量建议不低于20 mL；

3）离心去细胞碎片：将样品转移至离心管中，于4℃以3,000×g离心10 min，去除样品中的细胞碎片(若沉淀较多，可3,000×g, 10 min离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液)；

4）离心去杂质碎片：将离心上清液转移至新的离心管中，于4℃以10,000×g离心10 min, 去除样品中的杂质碎片；

5）样本过滤：去除杂质碎片的离心上清液转移到50 mL离心过滤住中，于4℃以3,000×g离心10 min，取过滤柱下室液体(注：若上室中有残留液体，可重复本步骤获取更多样本量)；

6）上清液转移：去除杂质碎片的上清液转移到新离心管中。

2.外泌体提取

1）上清液预处理：在去除杂质的离心上清液中加入41207-A试剂，具体的加入量如下(其他样品量根据表中试剂用量进行等比例变换):

 

2）溶液混合：加入41207-A试剂后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1min，再放置4℃静置8h以上(注：增加静置时间可提高外泌体得率，但不可超过24h)；

3）沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于4℃以10,000×g离心60 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒(注：尽可能吸尽上清液)；

4）再次离心：将含有沉淀的离心管再次于4℃以10,000×g离心2 min，弃上清(注：尽可能吸尽上清液)；

5）外泌体重悬：取合适量的41207-B试剂均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中(建议每20 mL尿液用200 μL左右41207-B试剂重悬)；

6）收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12,000×g离心2 min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒(若沉淀较多，可12,000×g, 2 min离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液)；

7）外泌体的保存：纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。

 

注意事项

 

1. 使用前请将外泌体抽提试剂（41207-A）充分混匀;
2. 将外泌体样本与裂解液按体积比1:1混匀后置于冰上裂解10 min；
3. 于4℃以12,000×g离心5 min取上清，用BCA法测定蛋白浓度及进行Western Blot等后续实验；  
4. 进行Western Blot实验时，取CD81阳性对照品5 - 20 μL与实验样品平行上样；

注：初次使用CD81阳性对照品时，可根据自身实验条件, 通过预实验确定合适的上样量以获得更佳的实验结果；

1. 二抗Goat anti-Rabbit IgG antibody (HRP)稀释比例建议为1:2000~1:5000；
2. CD81阳性对照品上样前需70℃煮样5 min，BCA及Western Blot实验相关试剂需自备。

 

 

Ver.CN20250314