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免疫组化检测试剂盒(POD显色)(小鼠IgG)

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  • 西格
  • XG-X10904
  • 进口、国产
  • 2025年07月12日
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    • 英文名

      SABC Kit-POD(Mouse IgG)

    • 保质期

      详见说明书

    • 供应商

      上海西格

    • 保存条件

      低温冷藏

    • 规格

      100T-200T

    免疫组化检测试剂盒(POD显色)(小鼠IgG)操作步骤:
    1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
    2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
    3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
    4、将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
    5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
    6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
    7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。本产品仅供科研活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
    8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
    9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率

    产品名称:免疫组化检测试剂盒(POD显色)(小鼠IgG)
    英文名称:SABC Kit-POD(Mouse IgG)

    产品规格:100T-200T
    发货周期:13
    本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验DAB显色。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABCStreptAvidinBiotin ComplexSABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
    保存条件:-20℃,如经常使用,可将封闭液,3% H2O220×DAB显色液B存放于28℃以方便使用。
    操作步骤(以石蜡切片为例):
    1.切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)
    23% H2O2室温处理510分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
    3.可选步聚:
      a、热修复抗原,将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液(PH6.0,电炉或微波炉加热至沸腾 后断电,间隔510分钟后,反复12次。冷却后PBSpH7.27.6)洗涤12次。
      b、酶消化,滴加消化液,37 10分钟,PBSpH7.27.4)洗涤23次。
      c、跳过此步,直接进入下一步。
    4.滴加5% BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
    5.用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37 孵育1小时左右或20 2小时左右,也可4℃过夜。PBSpH7.27.4)洗涤3次,每次2分钟。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
    6.根据用量,用稀释液将Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠IgG工作液,2037℃孵育30分钟。PBSpH7.27.4)洗涤3次,每次2分钟。
    7.根据使用量,用稀释液将 SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl SABC-POD 浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液,2037℃,30分钟。PBSpH7.27.4)洗涤4次,每次5分钟。
    8DAB显色:根据用量,用PBSpH7.27.4)配制,按1ml PBS加入50μl 20×DAB显色液A,加入50μl 20×DAB显色液B 。充分混匀后滴加到切片上。室温显色,镜下控制反应时间,一般在 530分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
    9.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
    对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟,PBS漂洗两次,3% H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次,接上述第4步。
    对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,接上述第二步。
    注意事项:
    如果染色背景过高,在SABC反应之后,DAB显色之前,用加有0.010.02% TWEEN-20PBSTpH7.27.4)洗涤切片4次,PBS2次,然后DAB显色。
    细胞生物学研究有以下几个方面:
    细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
    ①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
    ②生物膜与细胞器的研究;
    ③细胞骨架体系的研究;
    ④细胞增殖及其调控;
    ⑤细胞分化及其调控;
    ⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
    ⑦细胞的起源与进化;⑧细胞工程.
    细胞生物学研究的常用技术有哪些:
    1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
    2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
    3.细胞工程:细胞培养。
    具有显著特点:
    灵敏度高,数据可靠,重现性好
    操作简便,省时省力
    水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
    无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
    为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
    适合于高通量药物筛选
    细胞培养的优点:
    1.研究的对象是活细胞
    在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
    2.研究条件可以人为控制
    pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
    3.研究的样本可以达到比较均一性
    通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
    4.研究内容便于观察、检测和记录本产品仅供科研
    采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
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      2)将混合物覆盖在膜表面,1-2分钟,摇晃使均匀。 3)用保鲜膜把膜包起来,放入夹板中。 4)在暗室中将X光片,覆盖在膜的上面,夹好夹子,曝光1min。 5)显影、定影。 6)根据结果调整曝光时间和曝光区域,得到最佳结果。 注意:荧光在一段时间后会越来越弱。 2.DAB显色 DAB(3,3二氨基联苯胺)和HRP反应产生棕色的不溶终产物。这种棕色沉淀不溶于酒精和其它有机溶剂,对于必需使用传统复染和封固介质的免疫组化染色应用特别理想。 对于AP标记的二抗我们选用BCIP

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      (1)DAB显色时间不是固定的,主要由显微镜下控制显色时间,到出现浅棕色本底时即可冲洗; (2)DAB显色时间很短(如几秒或几十秒)就出现很深的棕褐色,这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长,需要下调抗体浓度或缩短你的抗 体孵育时间; (3)此外,若很短时间就出现背景很深,还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全,需要延长封闭时间; (4)DAB显色时间很长(如超过十几分钟)才出现

    • 进阶:6 年免疫组化经验总结

      5、切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长(大于 24 h):原因上不清楚,但现象存在。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复,第二天加抗体进行免疫组化染色,如果将装有切片和修复液的容器放在 4ºC 冰箱过夜,对结果无明显影响,如果放在室温,特别是炎热的夏天,会出现背景着色,因此,不可存放时间太长。   6、一抗变质、质量差的多克隆抗体:注意抗体的有效期,过期的抗体要么不显色要么背景着色。用新买的抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。

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