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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 物种来源:
人
- 库存:
26
- 英文名:
B16-F0;B16F0
- 供应商:
上海西格
- 规格:
1×106
细胞培养操作
1) B16-F0细胞复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。 3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞,再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,用新鲜的完全培养基重悬 细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞 的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注:运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议 1:2 传代 。
9. 注意: 1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
使用者不得将本库细胞系(株)转让给第三者。使用者在发表研究论文或结果时,应注明细胞系(株)的来源。


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| McCoy's 5a完全培养基: | B16-F0细胞 食道癌细胞 |
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文献和实验细胞增殖快非常好养,但是要及时换液,否则也很容易死亡、或变形。我养的最好的时候,天天都在换液,两三天就要消化传代。我用的消化液一般是 消化用含EDTA的胰酶0.25%,个人感觉效果比较好一点。消化步骤:吸出培养液,加入PBS洗涤(视培养瓶大小加入相应的量,25CM加入1-2ML)而后加一次胰酶(25CM培养瓶加0.6ML)作用2-3分钟,轻轻摇晃使均匀作用在细胞层面上。要一直在显微镜下观察,以防消化过头,等细胞从梭形变成椭圆形(或是棱角变钝),本来连成片的细胞之间开始有小小的空间,细胞与细胞
广泛存在于从高等植物到藻类的光合生物中的细胞色素,具体存在于叶绿体的类囊体膜上,可用有机溶剂或表面活性剂提取出来。分子量 3万数千,含有血红素 c。氧化还原电位为 0.36V,还原型的α带和γ带( Soret带)的吸收峰分别在 553— 556nm和 420nm附近。为光合作用的电子传递体,位于连结光化系统Ⅰ和Ⅱ的电子传递系统中,起着将电子从质体醌传递给质体蓝素(在某种藻来说是细胞色素 c553 )的作用。
细胞色素b/f复合物(cytochrome b6-f complex)
类囊体膜上可分离出来的多亚基膜蛋白。它由四个多肽组成: 即细胞色素f、细胞色素b6、一个铁硫蛋白和一个分子量为17kDa的多肽。前三个都是电子载体。细胞色素f也是c型的细胞色素,与线粒体的细胞色素c1关系密切。该复合物位于基质面, 功能是参与电子传递。
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