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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温或干冰运输
- 保质期:
无限
- 英文名:
B16-F1(小鼠黑色素瘤细胞)
- 库存:
1×10⁶cells/T25培养瓶
- 供应商:
上海沪震实业有限公司
- 规格:
50-100万个细胞数
B16-F1细胞产品概述:
| B16-F1 小鼠黑色素瘤细胞
|
|
| 细胞名称 |
B16-F1(小鼠黑色素瘤细胞) |
| 种属 |
小鼠 |
| 年龄(性别) |
|
| 组织来源 |
|
| 生长特性 |
贴壁 |
| 细胞形态 |
上皮细胞样 |
| 背景描述 |
B16-F1细胞是B16-F0细胞的亚系,源自黑色素瘤C57BL/6J荷瘤小鼠的皮肤;B16-F1细胞可产生黑色素。 |
| 生长培养基 |
DMEM高糖+10% FBS+1% P/S |
| 培养条件 |
气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃ |
收到常温B16-F1细胞后如何处理?
1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
B16-F1细胞传代操作步骤
一、贴壁细胞传代
1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞。
3.加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用。
4.用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡。
5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
二、悬浮细胞传代
1.将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min。
2.弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液。
3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
温馨提醒:
1、可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中,备用;细胞首次传代时,可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用,让细胞逐渐适应培养条件。
2、确认细胞状态良好后,应及时将部分细胞冻存,再进行后续的实验,避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失,影响后续实验。
3、建议客户收到细胞后前3天,100X、200X、400X各拍3张细胞照片,记录细胞状态,便于后续和技术支持沟通交流。
订购B16-F1细胞事先需要准备什么?
客户应具有一定细胞培养知识与经验,并具备基本实验设备,如细胞培养实验室、无菌操作台、CO2培养箱,倒置显微镜等;还应准备好相应的无菌培养基、血清、双抗、细胞培养瓶、培养板等。
细胞发货标准是什么?规格、数量是多少:
细胞发货时,保证细胞处于生长对数期;贴壁细胞达到75%以上汇合度,约5×10^5cells/T25细胞培养瓶;传代次数5代以内;冻存细胞发2个冻存管;无微生物污染。
B16-F1细胞发货形式:
细胞通常用T25细胞培养瓶培养,发货时用相应的完全培养基灌满细胞瓶,密封瓶口后放在包装盒内,以快递的方式发送给客户。天气变冷,最低温低于4℃时,以冻存细胞,干冰运输的方式发货。
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文献和实验细胞增殖快非常好养,但是要及时换液,否则也很容易死亡、或变形。我养的最好的时候,天天都在换液,两三天就要消化传代。我用的消化液一般是 消化用含EDTA的胰酶0.25%,个人感觉效果比较好一点。消化步骤:吸出培养液,加入PBS洗涤(视培养瓶大小加入相应的量,25CM加入1-2ML)而后加一次胰酶(25CM培养瓶加0.6ML)作用2-3分钟,轻轻摇晃使均匀作用在细胞层面上。要一直在显微镜下观察,以防消化过头,等细胞从梭形变成椭圆形(或是棱角变钝),本来连成片的细胞之间开始有小小的空间,细胞与细胞
B16鼠黑色素瘤细胞。好像这株细胞还有亚型的,不过中科院说不清,我也就说不清了。总之是B16。细胞总的来说比较好养,操作基本都是常规的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培养,一段时间为了省钱用过新生牛也不错。但是传代多了,细胞有形态改变。可以弃掉重新复苏。血清国产的杭州四季青,感觉不灭活比灭活要好养一些。传代操作,主要是无菌操作。细胞增殖快非常好养,但是及时换液,否则也很容易死亡、或变形。消化用胰酶0.25%,可以用含EDTA的,效率更高一点。消化步骤:弃血清——用D-hank's
了垂体单位在肿瘤免疫中的作用。为此构建了皮下移植瘤小鼠模型并检测了垂体激素的水平变化,皮下移植的细胞系包括免疫检查点疗法耐药的细胞系(LLC 肺癌细胞和 GMCSF 过表达的 B16F10 黑色素瘤细胞)和免疫检查点疗法敏感的细胞系(MC38 结肠癌细胞系和 MCA205 纤维肉瘤细胞)。结果发现,荷瘤小鼠模型血清中 α 促黑激素(α-MSH)的产生明显增加(图 1 A,B)。阿黑皮素原(POMC)经加工可产生 α-MSH,且正常情况下 POMC 主要在垂体中表达(图 1 C)。相比于对照组小鼠
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