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简称胰酶EDTA消化液
液体,2.5g 猪胰蛋白酶和0.2g EDTA溶于1升PBS。不含钙和镁。-20℃保存, 过滤除菌,-20℃保存
此试剂使用前,可适当分装一下,使用时,最好是预热到37度,镜下控制消化时间。
产品简介:
我们生产的胰蛋白酶消化液一共有三种,分为胰蛋白酶-EDTA消化液(不含酚红);胰蛋白酶-EDTA消化液(含酚红);胰蛋白酶消化液(不含酚红),可根据客户的需要来选择。
其中,胰蛋白酶含量为0.25%(2.5g/L),EDTA含量为0.02%(0.2g/L)。PBS为常用的不含钙镁的细胞培养用PBS。经无菌过滤,可直接使用。
保存条件:
-20℃保存,一年有效。客户收到产品后,可以适当的分装后冻存,每次取一支出来使用。
注意事项:
1.在分装胰蛋白酶-DETA消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。
2.胰蛋白酶-DETA消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 贴壁细胞的消化:
a) 吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
b) 加入少量消化液,略盖过细胞即可,室温放置30秒至2分钟或者更长时间。不同的细胞消化时间有所不同,必要时可放37℃消化。
c) 显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
d) 如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。
e) 如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2. 组织的消化:
不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
| C0170 | 10×PBS,PH7.2-7.4,10倍浓缩液,液体 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
| C0260 | 1M Hepes溶液(细胞培养) | NobleRyder | 125ml | 236.00 |
| C0140 | D-Hanks(HBSS)不含钙镁,不含酚红 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
| C0130 | D-Hanks(HBSS)不含钙镁,含酚红 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
| C0100 | D-PBS(DPBS) | NobleRyder | 500ml | 80.00 |
| C0120 | Hanks(HBSS)含钙镁,不含酚红 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
| C0110 | Hanks(HBSS)含钙镁,含酚红 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
| C0190 | L-谷氨酰氨溶液(L-Glutamine,Liquid)(200mM) | NobleRyder | 125ml | 80.00 |
| C0160 | PBS缓冲液(液体)PH7.2-7.4 | NobleRyder | 500ml | 80.00 |
| C0200 | 丙酮酸钠溶液(Sodium Pyruvate)100mM | NobleRyder | 125ml | 100.00 |
| C0250 | 非必需氨基酸溶液(100×) | NobleRyder | 125ml | 140.00 |
| C0240 | 青链霉素混合液(100×) | NobleRyder | 125ml | 80.00 |
| C0050 | 细胞冻存液 | NobleRyder | 100ml | 360.00 |
| C0210 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)不含酚红 | NobleRyder | 125ml | 90.00 |
| P0220 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)含酚红 | NobleRyder | 125ml | 90.00 |
| C0230 | 胰蛋白酶消化液(0.25%)不含酚红 | NobleRyder | 125ml | 90.00 |
| N0080 | 2×HEPES缓冲盐溶液 | NobleRyder | 100ml | 100.00 |
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文献和实验问:请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用!多谢!答:1、胰酶是0.25%,这是质量体积比,就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意,尽量不要用水来溶,因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是0.02%-0.1%,根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的,容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响,因此使用时要甚重。如果影响贴壁,但消化时必须要用,那么在用完全培养基终止消化后,可离心弃上清,再加完全培养基培养,可去除EDTA。如果对贴壁没
培养箱中。或者在消化时看到细胞有脱落的迹象即可去除消化液,加入适量的培养基轻轻吹打瓶壁,根据细胞密度按照比例接种到细胞培养瓶。经长期对比发现,此方法比离心传代对细胞的损害较小。冻存1. 选择处于对数生长期的细胞。在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉,用 0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶,加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞,使其成为均匀分散的细胞悬液,然后将细胞收集于离心管中离心 (800 r/min,20 S)。2. 配制冷冻保存溶液 (使用前配制
实验材料: 1. 肺组织:取自妊娠14—18周的胎儿; 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2; 3. 消化液:0.25%胰蛋白酶(pH7.6—7.8),0.02%EDTA溶液; 4. 培养液:DMEM或RPMI1640,加10%—20%胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml; 5. 保存液:10%二甲亚砜或10%甘油; 6. 眼科剪、眼科镊等无菌消毒手术器械;
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