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- 2025年11月22日
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诺博莱德
辣根过氧化物酶（HRP）标记套装
| 组成 | 规格 |
| HRP（辣根过氧化物酶） | 10mg |
| NaIO４ | 500mg |
| NaBH４ | 100mg |
| 100mM乙酸钠（PH4.4） | 5ml |
| 0.2M PH9.5 CB | 25ml |
| 透析袋MD10(8000-14000) | 20CM |
| 透析袋MD25(8000-14000) | 20CM |
| 铁夹（夹透析袋） | 两支 |
产品说明：本套装是将HRP标记的常用试剂集合为一体而成。本操作流程为经碘的高碘酸氧化法。适合于蛋白等含有氨基物质的标记。特别是抗体的标记。
如果待标记物分子量太小（如小于15KD），可能会穿过透析袋而造成样品损失。
标记原理：在低PH下使RP经NaIO４氧化后形成的醛基可蛋白等分子的氨基相连，形成斯夫氏硷，后者可进一步用NaBH４还原生成稳定的酶标记物。
操作方法：
一，标记量的计算：HRP（辣根过氧化物酶）分子量为40KD左右。一般为HRP：待标记物＝2：1到4：1之间。比如抗体IgG分子量一般为150－160KD。则10mgHRP可标记抗体在10mg-20mg之间。
二，计算好各步反应时间。作好开始标记的准备工作，最好是从下午开始。将HRP（辣根过氧化物酶）一共10mg加入1ml双蒸水溶解。溶解后可放－20度存放一个月。如果想作两次标记，可适当称量5mg。但并不推荐称量更小的质量。以免产生更大误差。而且透析袋一般也只够两次用量。
三，剪切合适长度透析袋，用双蒸水清洗三次备用。透析袋分宽窄两种，适合于不同量样品的透析，请自己安排。称取21.3mg NaIO４，加入0.5ml双蒸水溶解(现配现用，浓度为0.2M)，将100mM乙酸钠（PH4.4）用双蒸水稀释100倍成1mM乙酸钠（PH4.4）。准备待标记物，如果待标记物本身盐含量很低并且缓冲力差，如生理盐水，可等二天再准备。如果不确定，将0.2M PH9.5 CB稀释20倍（请不要一次稀释完，留1－2ml左右备用），作为透析液，将待标记物装入透析袋中4℃透析过夜，透析袋适当留长约2ml体积的量以备第二天加入酶（透析袋使用请见附录）。
四，以一次标记完为例，如果标记量小，可按比例减小试剂的用量。取0.2ml现配的NaIO４溶液加入HRP溶液中，混匀，避光常温反应两小时。装入透析袋中，在稀释过的乙酸钠（PH4.4）溶液中4℃透析过夜（透析袋使用请见附录）。
五，第二天早上，如果样品为固体，可用水溶解，加入1/20体积的0.2M PH9.5 CB，混匀。取出活化好的HRP装入一适合离心管中，加入50ul 0.2M PH9.5 CB，混匀，立刻加入待标记物中，混匀。避光常温反应两小时。
六，加0.1ml新配的10mg／ml NaBH４液，混匀，常温半小时。
七，配制合适的透析液，如生理盐水或者PBS等。透析酶标记物。
八，如果有条件进一步纯化，可透析半天后去进一步纯化，如果不纯化，请在4℃透析至少24小时。勤换液。
附透析袋使用方法：
本透析袋已预处理过，用双蒸水清洗后将水用适当吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用铁夹，但如果铁夹不够用，下部可用细线或者其他的透析袋夹。
将透析袋轻轻的折上两到三折。用线或者透析袋夹封住，上面支开，加入待透析物，留一定量的空气在顶上，并小心的折一折，用铁夹夹住，轻轻的挤压，如没发现有液体流出，可放入透析液中。一般透析可用纯净水瓶去顶使用。用一次性筷子或者其他合适物穿过铁夹，将透析袋吊在透析液中，补充透析液，使透析液盖过透析袋中的液面而不要淹过铁夹下面。
| P0910 | 0.01M PBS(干粉) PH7.2-7.4 | NobleRyder | 2L | 8.00 |
| P0930 | 0.1%胰蛋白酶液消化液 | NobleRyder | 10ml | 120.00 |
| A0970 | 10×多聚赖氨酸溶液(免疫组化) | NobleRyder | 10ml | 260.00 |
| A0980 | 4％多聚甲醛 | NobleRyder | 100/500ml | 60.00/200.00 |
| A0940 | AEC显色试剂盒(20×) | NobleRyder | 1ml/10ml | 100.00/400.00 |
| A0960 | BCIP/NBT显色试剂盒 | NobleRyder | 100ml | 380.00 |
| A0950 | DAB显色试剂盒（20×） | NobleRyder | 3ml | 100.00 |
| P1150 | FITC标记套装 | NobleRyder | 一套 | 640 |
| P0010 | Mayer';苏木素染液 | NobleRyder | 10ml/100ml/500ml | 60.00/240.00/680.00 |
| P1140 | 抗体稀释液(一抗稀释液) | NobleRyder | 10ml/100ml | 40/280 |
| A0990 | 抗荧光衰减封片剂 | NobleRyder | 5ml/25ml | 70.00/240 |
| P1100 | 辣根过氧化物酶（HRP）标记套装 | NobleRyder | 一套 | 560 |
| P0020 | 柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L，pH6.0， | NobleRyder | 1L | 8.00 |
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文献和实验1. 8 mg 辣根过氧化物酶放入1 ml玻璃瓶，加入1 ml双蒸水溶解，液体呈棕色。 2. 放入一个磁力搅拌子，电磁搅拌同时逐滴缓缓加入新配制的 NaIO4 0.2 ml，室温下继续搅拌40 min，液体呈现草绿色。 3. 将全部溶液用滴管装入反复用去离子水冲洗的透析袋中，4 oC 对1 mM pH 4.4的NaAc透析过夜，中间换液3－4次，每次300 ml，溶液最终呈浅棕色。 4.
差异。如以2,2’-联氮-双-[3-乙基苯并噻唑啉]-6-磺酸(ABTS)为氢供体，则只能保护20％的酶活性，而以邻联茴香胺(ODA)为氢供体时，酶活性的保护提高至90％。HRP之所以是迄今为止在ELISA中应用最为广泛的标记用酶，主要是因为其一方面易于提取，价格相对低廉；另一方面性质稳定，耐热及有机溶剂的作用，与抗原或抗体偶联后，活性很少受损失。
辣根过氧化物酶标记凝聚素的组织化学染色程序 1．组织切片脱蜡处理等同前； 2．流水冲洗5分钟，3％H2 O2 孵育10分钟(阻断内源性过氧化物酶，避免假阳性)； 3．PBS漂洗3次，每次5分钟； 4．1％牛血清白蛋白孵育，室温20分钟，移去多余液体； 5．加入PBS稀释的辣根过氧化物酶―凝集素，置湿盒内孵育。室温1．5小时； 6．PBS漂洗3次．每次5分钟； 7．呈色 DAB
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